RNA实验技术

mRNA的分离与rRNA和tRNA不同的是，哺乳动物细胞的绝大部分mRNA在其3'端均有一poly(A)尾，因此可以用oligo(dT)－纤维素亲和层析法从大量的细胞RNA中分离mRNAdmonds等，1971;At Leder，1972）。在构建cDNA文库时， 必须经上述纯化步骤制备mRNA模板。进行Northern杂交或Sl 核酸酶作用图分析时，与总RNA相比，采用poly(A)+ RNA能获得更为满意的结果。 可以按照Gilham ...

1，用异硫氰酸胍提取提禽流感病毒的详细步骤，可参考（我提过N次做定量PCR都没问题）：1.取200ul样品数+阴性对照+阳性对照个1.5ml灭菌eppendorf管2.加600ul异硫氰酸胍，然后加入对照和样品，再加200ul氯仿，颠倒混匀3.13000rpm离心15min4.在第3步离心快结束时，另取同样多eppendorf管，加入400ul -20度预冷的异丙醇5.取第3步离心的上清（一定不要吸取到中间白色层，第3步 ...

RNARNARNARe:求助RNA电泳图Amplification RNA with RT-PCRModel of RNA interferenceRNA informatics胸腺RNARNA电泳ＲＮＡ保存Re:RNARNA定量Re:RNA 电泳图Re:请教：RNA电泳RNundefined1提取RNA:RNA 提取提RNARe:RNARNA怪事！Re:请问 RNA decoy 的翻译Re:请教：RNA提取和RT－PCR【资源共享】Mammalian RNA Interferen ...

试剂盒公司型号次数价格推荐指数mRNA提取生工SK141110次750SK141220次1100mRNA提取invi K1580-96TAKARA230066 rxns7059mTRAPTMMaxi 235065 x 6 rxns30019mTRAPTMMaxi 晶美2309696次9605mTRAPTM 962309796次11815mTRAPTM 96 w/MAG-96promegaZ542015 isolations420PolyATt ...

分享我刚找到的有关RNAi的资料，现附目录如下，希望对战友们有用，如果您觉得不错，烦劳顶一下，呵呵（共42个分卷压缩包）=========================================2002年世界十大科学成就之首.caj2006年生命科学的十大新闻.txtH1启动子siRNA载体的构建及应用.kdhmicRNA和siRNA基因调控技术研究进展.cajmiRNARNAi和siRNA.cajRNAi_DNA稳定表达载体的构建与应用.k ...

RNA 真不好提取,这是我在网上看到的,和大家共享!!对大部分实验人员来说，RNA 抽提比基因组 DNA 抽提要困难得多。事实上，现有的 RNA 抽提方法/试剂，如果用于从培养细胞中抽提 RNA，比抽提基因组 DNA 更方便，成功率也更高。那为什么同样的方法用于组织 RNA 的抽提，总会碰到问题呢？组织 RNA 抽提失败的两大现象是： RNA 降解和组织内杂质的残留。关于降解问题，首先看一下为什么从培养细胞中抽提 RNA 不容易降解。现有的 RNA 抽提试剂，都含有快速抑制 Rnase 的成分。在培 ...

快速的操作，低温环境，少量取上清主要是抽提之后吸取上清时要特别小心，只要不把蛋白层吸出来就不会有RNase污染。分子克隆第二版343页,上关于提取RNA所用的玻璃容器的处理方法,是用前180度干烤8小时或更长时间;另一种方法是0.1%的depc水浸泡(37度2小时),然后灭菌水淋洗数次,100度干烤15分钟,然后高压灭菌除去depc.我们实验室一直是用170度考4小时,且不准离人,不准过夜,可能是怕烤箱长时间高温, ...

RNA干扰（RNAi）：近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。MicroRNA（miRNA,微RNA）：即为长度为22nt左右的5′端带磷酸基团、3′端带羟基的非蛋白编码的调控小RN ...

概述microRNA(miRNA)是一类由大约22 个核苷酸组成的非编码小分子RNA，广泛存在于真核生物中。miRNA 在个体发育的不同时期及不同组织中有不同的表达模式，都表明了其在发育和分化中起有重大的调控作用。迄今为此，对miRNA 的检测方法主要有Northern Blot 等基于分子杂交的方法，这些方法敏感度低、耗时长、RNA 的用量较大。miRNA Q-PCR Detection Kit 采用了国际上公认的核酸检测标准技术――Real-Ti ...

miRNA是一种重要的非编码RNA，调控至少 30% 以上的基因表达，参与多种生理病理过程。2011年4月27日，Sanger microRNA序列数据库(miRBase)升级至17.0版。在新版本中，发夹前体序列升至16769条，新增1597条；成熟miR和miundefined产物共19724条，新增2383条；新版本报道序列共涵盖153个物种。目前已公布的人成熟microRNA为1711个，还有大量预测的microRNA基因需要通过 ...

RNAi－－从理论到实践，再到诺贝尔医学和生理学奖RNAi早期研究RNAi（RNA interference）是一古老的机制，最初来源于1990年Napoli在牵牛花Napoli et al. Plant Cell, 1990和Cogoni在脉孢菌Cogoni C and Macino G. Proc Natl Acad Sci U S A. 1997中的发现，即转基因的共抑制现象（consuppression）。早期认为基因共抑制是基因副突变的范畴，但是靶基因序列具有明显不同的特征 ...

1.在设计RNAi实验时，可以先在以下网站进行目标序列的筛选：http://www.ambion.com/techlib/misc/siRNA_finder.htmlhttp://katahdin.cshl.org:9331/RNAi/http://www.ic.sunysb.edu/Stu/shilin/rnai.html2.RNAi目标序列的选取原则：（1）siRNAs with lower G/C content (35-55%) are more active ...

1.关于Trizol的购买：目前市面上买的大多是100ml装的，比较出名的是Invitrogen公司的Trizol，100ml原装的据说要1200大洋以上，不过有一种据说香港分装的，只需600元，但是相对国产品牌三四百元的价格还是贵了一些。国产很多公司都有类似的Trizol试剂，价格大多三百多元，成分都差不多，可以说都是invitrogen的山寨产品。比如我用的是北京一家公司的，四百多，做出来也还不错。Taka ...

siRNA，shRNA，dsRNA，miRNA间的区别RNA干扰（RNAi），即用20多个核苷酸组成的短的双链RNA（siRNA）代替传统反义核酸进行转录后基因沉默，已经迅速而广泛地应用到基因功能，基因表达调控机制研究等热门领域，并为基因治疗开辟了新的途径。近两年来，这方面的科学论文及报道爆炸性增长，几乎每天都有新的结果涌现。这些论文中，出现了很多与RNA干扰相关的概念，意思很相近但并不完全相同，这里列举了几个常见 ...

RNAi的实验原理与方法近年来的研究表明，将与mRNA对应的正义RNA和反义RNA组成的双链RNA(dsRNA)导入细胞，可以使mRNA发生特异性的降解，导致其相应的基因沉默。这种转录后基因沉默机制(post-transcriptional gene silencing, PTGS)被称为RNA干扰（RNAi）。一、RNAi的分子机制通过生化和遗传学研究表明，RNA干扰包括起始阶段和效应阶段(inititation and effe ...

Methods in Enzymology ,Volume 427Elsevier Science,2007; 304стрISBN: 0123739179MicroRNAs (miRNA) are tiny bits of genetic material that were unknown nearly 10 years ago but now represent an exciting field of study in biology. Upon their discovery, researchers revealed for the first t ...

1 基因表达调控简介所谓基因调控，是指生物体内控制基因表达的机制。基因调控主要发生在3个水平上，即一是：DNA水平上的调控、转录控制和翻译控制；二是：微生物通过基因调控可以改变代谢方式以适应环境的变化，这类基因调控一般是短暂而可逆的；三是：多细胞生物的基因调控是细胞分化、形态发生和个体发育的基础，这类调控一般是长期而不可逆的。基因调控的研究有广泛的生物学意义，是发生遗传学和分子遗传学的重要研究领域。生物体内决定细胞 ...

由于PCR版已经加分，本版不再加分。感谢支持！经过一段时间的RT-PCR实验，我的实验没有多大进展，但是提取RNA倒是有了一点体会，在这里写出来，与大家共同分享，希望对新手是个帮助，也希望各位战友能够批评指正，谢谢！RNA提取心得一 组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80°或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4°，注意不要拿到常温 ...

几乎所有的siRNA都不可避免的产生off-target效应，好一点的也许只会off-target几个基因，差一点的甚至可以off-target几十个基因。关于off-target的机制，以前认为是siRNA的sense strand对于其他基因mRNA的干扰造成，对于这个效应，可以利用最新的化学修饰方法削弱sense strand与RISC的结合，同时增强anti-sense与RISC的结合力，按照这个原理虽然也可 ...

Let-7与肿瘤的关系，一个经典实例的完整再现，一次实战演习microRNAs完整解决方案暨国内首次生物美学技术培训班广州莱德尔生物科技有限公司与您相约2009年3月9日-2009年3月18日不容错过的理由：专业的品质，丰富的经验，莱德尔带您步入小分子的殿堂，与您分享microRNA研究最完整的解决方案。群雄逐鹿的战场上一块仅存的处女地，microRNA研究最后一次不容错过的良机：microRNA启动子的表 ...