在RNAi过程中，siRNA会识别mRNA上的靶点区域，并引导AGO等多种蛋白在该区域组成一个沉默复合体（RNA-induced silencing complex，RISC），在该区域的特殊位点将mRNA切开，造成mRNA降解，但这个靶点识别、切割及释放的具体过程及分子机制并不清晰。7月2日发布的Molecular Cell中，来自东京大学和第三军医大学的研究者利用单分子成像分析技术，成功地解析了RISC的工作过程。本项 ...
战友们，这个东东是我从网上搜来的，感觉不错！与大家分享！第一部分RNA 提取策略一、提取原理1、RNA降解的原因：内源性RNAase是造成RNA降解的最重要原因，因为人体细胞自身就是几十分钟（20min？）mRNA被降解一轮，所以不管是组织还是细胞还是液体状样本在离开其中细胞的最佳生活状态后都应该尽快的被妥善的方法保存起来。外源性RNA酶也是一个需要注意的因素，最常见的就是毛发尤其头发，灰尘，唾液，塑料手套这四个兄弟。 ...
Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液 1、组织匀浆(1)取出高温高压消毒后研钵，切取50-100mg冰冻组织置于研钵内，倒入液氮，研碎。(2)每50-100mg均浆组织标本中加入1ml的TRIZOL，标本的量不能超过TRIZOL体积的10%，否则会出现DNA污染。(3)将以上匀浆标本转移到1.5ml的EP管中，在15- 30°C放置 ...
刚才看到一个老兄讲到提高RNA浓度的方法,认为与离心的速度有关,其实不然.本人提的组织RNA的浓度,OD260/280值都在1.8-1.95之间,其中在相分离时上清吸取时不要吸到下一层很重要.本人现贴上TRIZOL说明书的RNA操作步骤,其中本人根据实验室的经验加以补充,供各位参考.Trizol 法提取RNA实验步骤需要的试剂：氯仿异丙醇75%乙醇（in DEPC-treated water)RNase free水或者0.5% SDS溶液 ...
RNA WORK:RNA work is not fun. Although as a molecule, it is just as robust and sturdy as DNA (a little more even, since it can form some pretty fancy tertiary structures), it suffers because the nucleases (RNases) that can destroy it ARE very stable molecules.RNases are also EVERYWHERE.They don’t require d ...
RNA抽提一，准备工作1，实验器具与材料：（1）移液枪：1ml、200ul、10ul（2）吸头：1ml、200ul、20ul（3）吸头台：放置1ml吸头的一个，放置200ul和20ul的吸头一个（4）EP管1.5ml、100ul（5）玻璃研磨器（6）容量瓶：1000ml（7）盐水瓶：100ml（8）15ml塑料管一个（配75％乙醇用）2，实验器具的处理与准备（1）塑料制品：（包括吸头、EP管等）将塑料制品逐个浸泡于1‰DEPC水中（必要时 ...
Working with RNALiving with RNaseMost researchers are acutely aware of the risk of RNase contamination, and we do not want to belabor this point or cause undue worry. We do not routinely find it necessary to treat the microcentrifuge tubes used with RNA if they are from unopened bags or from bags in which ca ...
玻璃器具、研钵处理方法：洗洁精洗后自来水冲7遍，双蒸水冲3次，60℃烤干，泡酸过夜后自来水冲7遍，双蒸水冲3次。烤干，150℃烤4小时。枪头、EP管等处理方法：0.1%DEPC溶液浸泡过夜，取出高压灭活DEPC 15分钟。实验用水：均用0.02%DEPC处理水配制。0.02%DEPC处理水配制方法：配0.02%DEPC水溶液，15Psi高压15分钟。组织处理：迅速取出称取100mg，放入1.5 ml EP管中（未处理），置-70℃保存。提取方法： ...
1。提取RNA的原理http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2476706_0.html2。细胞RNA的提取（1）提取RNA要求的细胞数http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/72002_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/2860126_0.htmlhttp://www.dxy.cn/bb ...
引子：从06年12月份开始，断断续续做了一个多月的3’RACE，有了一些心得和体会。期间在丁香园看了很多前辈们分享的经验，受益匪浅。在这里，我就自己的经历略作总结，希望能给像我一样的新人们有点启示，少走些弯路，不当之处欢迎指正。一、试剂盒的选择：3’RACE从原理上就能明白，它比5’RACE 要容易得多，所以并不一定需要用进口试剂盒。原来准备用Takara 3’RACE的试剂盒，可是看了一下它的原理和内容，觉得挺挫的，自己DI ...
核酸版race相关问题 请教5race与3race克隆 RACE获得cDNA全长序列，怎么才能知道真的是全长呢？ 最近做RACE 遇到一些问题，希望高手指点 请教各位高手:3'RACE的问题 请问做RACE的试剂盒哪个牌子最好？ 比较一下5'RACE的这两个Kit 3'race法引物设计 求助克隆新基因-RACE 求助: 有关RACE的问题,谢谢各位高人先 RACE原理 本版race相关问题精华 有没有人用过TAKARA的3‘RACE试剂盒？ 5－RACE 问题，急。 RACE PCR ...
RNA提取心得一 组织RNA提取1.最好新鲜组织，这样RNA提取的效果比较好，这是肯定的。2.如果不是新鲜的（最好在半年之内，-80°或者液氮中冻存的）组织，注意不要反复冻融，从冰冻状态拿到0-4°，注意不要拿到常温，待组织解冻后，用DEPC泡过的剪刀剪一小块组织，称重后，放到预冷的匀浆器中，然后加入一定量的TRIZOL试剂，然后匀浆。注意：速度不要太快，要匀一会挺一会，否则由于摩擦产热，RNA遇热会加速降解。如果一次做多个标 ...
第一节 概 述 从真核生物的组织或细胞中提取mRNA,通过酶促反应逆转录合成cDNA的第一链和第二链,将双链cDNA和载体连接,然后转化扩增, 即可获得cDNA文库,构建的cDNA文库可用于真核生物基因的结构、表达和调控的分析;比较cDNA和相应基因组DNA序列差异可确定内含子存在和了解转录后加工等一系列问题。总之cDNA的合成和克隆已成为当今真核分子生物学的基本手段。自70年代中叶首例cDNA克隆问世以来,已发展了许多种 ...
原有战友发过，但发现链接基本已失效，现重新上传，有需要的战友请下载（本楼的4个附件要叮当，后面的免叮当）。下面是转载的书籍介绍：内容简介miRNA能抑制其他基因的表达，并且参与众多的生物学过程，包括细胞增殖、凋亡、细胞分化和发育。本书介绍了miRNA的基本概念：阐述了关于miRNA预测筛选、分离和测定的多种先进的技术和方法：提供了包括在植物、线虫、果蝇、鱼、鸡、小鼠和人类等一些物种中使用的多样化、新颖和有价值的miRN ...
自己整理的protocol,希望对大家有所帮助！Preparations:1.高压2遍的物品及试剂：Ep管移液枪头0.1%DEPC水—v/v, 室温静置过夜-高压2遍（大Ep管分装 后冻与-20℃）2. 试剂：Trizol（4度）100%无水乙醇（生产日期近，越久的挥发越多；及时盖盖）氯仿（三氯甲烷CH3Cl3）异丙醇3. 其它：手套【需要勤换-防止RNA酶降解RNA】；口罩；冰盒；刮匙。半小时前启动4度离心机。基本是室温操作。Protocol：1. ...
请人测了一株菌株的16SRNA序列，给了两段序列。使用Blast 分别检索后，结果不能确定到种，因而想用完整的序列进行检索，由于我不太熟悉序列分析，请朋友帮我看一下这两段能否组成一个完整的序列。1205013.S1.1541RCCTTCGATCGGCTACCTTGTTACGACTTCACCCCAATCATCTGTCCCACCTTAGGCGGCTGGCTCCAAAAAGGTTACCCCACCGACTTCGGGT ...
各位都知道，提取到质量良好的RNA（包括总RNA和mRNA，以下同）是非常困难，关于RNA的提取技术，我就不说了，为什么呢？或许各位非常关心呢，我是这样想的，我可以看到的资料或者是厂家的说明书，各位也同样可以看到的，内容当然都是一样的了，所以实验做的好不好，主要是心的投入多少的问题，所以希望大家自己多多思考啊！提取技术虽然不说了，但是我可以告诉各位如何准确确认RNA质量的有效方法（可能是最简单而有效的，如果你已经知 ...
从组织中提取总RNA1)液氮研磨，组织块直接放入研体中，加入少量液氮，迅速研磨，待组织变软，再加少量液氮，再研磨，如此三次，按50-100mg组织/mlTrizol加入Trizol，转移入离心管进行第2步操作。2) 匀浆：组织样品按50-100mg/mlTrizol 加入Trizol，另外，组织体积不能超过Trizol体积的10%，否则匀浆效果会不好，用电动匀浆器充分匀浆约需1-2分钟。从细胞中提取总RNA1) 培养贴壁细胞：不须消化 ...
真核生物mRNA的纯化以及cDNA文库的构建把带聚腺苷酸的mRNA
RNA 抽提中自备有机溶液的配制及保存问题RNA 抽提中涉及的有机试剂，包括苯酚、氯仿、异丙醇、乙醇。苯酚多为商品化的东西了，选择和保存都不应该有什么问题；只强调一点：尽管 Tris 饱和的苯酚也可以用于 RNA 的抽提，但使用水饱和苯酚会更好一些，因为 RNA 在 pH 7 以上的溶液中，发生降解的机率大大提高。下面是关于氯仿、异丙醇、乙醇的有关建议。选择国内大的化学试剂公司生产或者监制的分析纯级别试剂就完全可以满足要求。预处理不需要进行任何的预处理。绝 ...
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