DNA实验技术

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciensStrain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV31 ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法）一、准备工作1、缓冲液1×TSS的配制：事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DMSO，5ml 的 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciensStrain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV31 ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法）一、准备工作1、缓冲液1×TSS的配制：事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DMSO，5ml 的 ...

我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每次都很成功了，呵呵：）1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H基本都要加150uL左右。2. 解链时用50度水浴15分钟。3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。6 ...

我用了快4个月这个试剂盒了，下面是一些总结出来的经验，我现在诱变每次都很成功了，呵呵：）1. 我溶NaOH的水PH值大概在6.5左右，所以我每次调Reagent I的时候3MNaO0H基本都要加150uL左右。2. 解链时用50度水浴15分钟。3. 加入Reagent I后，50度水浴16小时。4. 加入Reagent II和III后，室温孵育10分钟5. 第一次离心用9000 rpm 5分钟。6 ...

BioGene-ExpuzeTMDNA 10分钟快速提取试剂盒中文说明书从全血样本提取DNA的操作规程1、在离心管中加入900 µl的溶液 1及250-300 µl的全血，振荡30秒。2、离心（9000 rpm，1分钟），倒掉上清液。3、先至少振荡30秒，以打破Pellet。4、加入400 µl 溶液2，振荡20秒使Pellet完全溶解（在光线下溶液应清亮透明） ...

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml Buffer ...

1)取30ml蓝藻溶液于10000rpm离心15分钟，将沉淀小心转至1.5mlEppendorf管中；2)用1 mlTE(PH8.0)洗沉淀，12000rpm离心10分钟，弃上清；加240μL BufferA和60μL的5M NaCl每管加Sarkosyl(原浓度是10％)至终浓度为0.1%。3)于4℃保温1小时；12000rpm离心2分钟，取沉淀。以500μL溶液（由49.99ml Buffer ...

DNA测序样品用什么溶液溶解比较好? 答：溶解DNA测序样品时用灭菌蒸馏水溶解最好。DNA的测序反应也是Taq酶的聚合反应需要一个最佳的 酶反应条件.如果DNA用缓冲液溶解后在进行了测序反应时DNA溶液中的缓冲液组份会影响测序反应的体 系条件造成Taq酶的聚合性能下降。 有很多客户在溶解DNA测序样品时使用TE Buffer。的确，TE Buffer能增加DNA样品保存期间的稳定性， 但TE ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

1．感受态的制备　　（1）接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。　　（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。　　（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。　　（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。　　（5）缓慢加入75mmol/L预 ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...

1．感受态的制备　　（1）接种单菌落于2ml LB培养液中， 37℃过夜。　　（2）取0.25ml过夜菌入25ml LB培养液中，37℃振摇4～6h至A590=0.4～0.6。　　（3）倒入50ml管内，水浴10min，以2500～3000rpm离心5min，弃上清。　　（4）缓慢加入75mmol/L预冷CaCl25ml悬浮菌体，冰浴20min，同上离心弃上清。　　（5）缓慢加入75mmol/L预 ...

我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其他战友遇到的情况 和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。筛选之前确定G418浓度：1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对 ...

我做了稳定转染，从G418浓度确定到最后的单克隆化鉴定。有自己的体会也有其他战友遇到的情况 和大家分享. 没有总结好的地方，大家补充。筛选之前确定G418浓度：1，由于每种细胞对G418的敏感性不同，而且不同的厂家生产的G418有效成分的比重不同，一般1g的粉剂中有效的G418含量大约为0.722g。2，G418是新霉素的类似物，两者都是通过抑制核糖体的功能和蛋白质的合成而杀死细胞的。但是新霉素对 ...

将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关重要。在实验中使用的每种试剂都必须小心校准，保证质量，因为甚至偏离最优条件十分之一个pH都会导致磷 ...

将制备好的siRNA，siRNA表达载体或表达框架转导至真核细胞中的方法主要有以下几种： 1.磷酸钙共沉淀将氯化钙，RNA(或DNA)和磷酸缓冲液混合，沉淀形成包含DNA且极小的不溶的磷酸钙颗粒。磷酸钙-DNA复合物粘附到细胞膜并通过胞饮进入目的细胞的细胞质。沉淀物的大小和质量对于磷酸钙转染的成功至关重要。在实验中使用的每种试剂都必须小心校准，保证质量，因为甚至偏离最优条件十分之一个pH都会导致磷 ...

方法一 A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。 取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3ml A ...

方法一 A液：1M，MnCl2： B液：1M，HEPES，pH=6.2-6.8，用无菌水配，配后不需灭菌； C液 称取CaCl2 0.10g，KCl 1.18g，全部转入细口试剂瓶，然后加入46ml三蒸水，轻轻振荡使所有组分充分溶解。将瓶塞盖上并用牛皮纸、棉线包扎，然后放入灭菌锅121℃高压灭菌备用。 取1管B液（0.6ml），全部加入C液(46ml)中，混匀后，再用1ml移液器加入3.3ml A ...