DNA实验技术

脂质体靶向制剂及质量控制评价一、靶向制剂的定义与分类　　靶向制剂亦称靶向给药系统(targeting drug delivery system，TDDS)。系指载体将药物通过局部给药或全身血液循环而选择性地浓集定位于靶组织、靶器官、靶细胞或细胞内结构的给药系统。　　靶向制剂特点：定位浓集、控制释药、无毒及生物可降解性等。　　靶向制剂主要有如下几类：　　1、被动靶向制剂(passive target ...

毕赤酵母高效转化实验方案1.收集菌体取1mlGS115过夜培养物(OD约6-10) 分装到1.5ml EP管中，4℃、10000g 离心1min，弃上清，沉淀用无菌水(4℃)洗涤，同样条件下离心，弃上清。2.菌体处理加入1ml处理液，室温下放置20min。处理液：10mM LiAc10mM DTT0.6M sorbitol10mM TrisHCl(pH7.5)3.离心，弃上清，加入1ml 1M s ...

毕赤酵母高效转化实验方案1.收集菌体取1mlGS115过夜培养物(OD约6-10) 分装到1.5ml EP管中，4℃、10000g 离心1min，弃上清，沉淀用无菌水(4℃)洗涤，同样条件下离心，弃上清。2.菌体处理加入1ml处理液，室温下放置20min。处理液：10mM LiAc10mM DTT0.6M sorbitol10mM TrisHCl(pH7.5)3.离心，弃上清，加入1ml 1M s ...

最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNase A 作用于 RNA 的结果是：大的 RN ...

最糟糕的心态 - 实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？最糟糕的知识 - RNase A 的作用。RNase A 是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNase A 作用于 RNA 的结果是：大的 RN ...

实验原理:Southern印迹是将DNA片断从电泳凝胶上直接转移至膜支持物（如硝酸纤维素膜、尼龙膜）上，使DNA片断固定的技术。先将DNA经限制性内切酶消化成一系列片段，进行琼脂糖凝胶电泳，各片段因分子量不同而彼此分开，然后经碱处理凝胶，使DNA的片段被变性、中和并通过毛细作用在高盐缓冲液中在原位将单链核酸转印到硝酸纤维膜上，烘干、固定。试剂和器材一、试剂变性液：1.5mol/L NaCl，0.5 ...

1. Run gel (0.8 -1.0% agarose is best). For yeast chromosomal Southerns digest 20 μg DNA. Use 50 ml minigel for most purposes. Photograph gel but minimize exposure to UV light.2. Depurination: Place g ...

SolutionsProtocol:Digest 5-10 μg genomic DNA overnight with restriction enzyme of choice.Run digested gDNA on 0.8% TAE gel with marker (with no ethidium bromide)Transfer Setup:1. Remove gel and place ...

Southern Blotting: DNA Transfer1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels) 7' (large gels)2. Denaturation: Wash gel in (0.5 M NaOH 1.5 M NaCl) for 20' (small) to 30' (larg ...

20x SSC:3M NaCl0.3M Na-citrate; pH7.0Hybridization Sol'n:5x SSC0.5% (w/v) Blocking Reagent0.1% (w/v) N-lauroylsarcosine Na-salt0.02% (w/v) SDS50% (w/v) formamidundefinedBlocking reagent does not dissolve rap ...

对微量的双链 DNA 进行定量在各种生物学应用中都显得非常重要，包括标准的分子生物学技术中的应用，例如 cDNA 文库的建立；用于亚克隆的 DNA 片段的纯化；诊断技术中的应用，例如定量 DNA 扩增产物，在药物研究中测定 DNA 分子。 最常用的检测核酸浓度的方法就是检测核酸在 260nm （ A260 ）处的光吸收。这一方法最主要的缺点就是单链核苷酸和单核苷酸会产生干扰信号。核酸样品中的杂质也 ...

本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不容易吊出来，并装进了自己的载体，却发现有一两个碱基跟自己的预期 ...

本贴先讲最简单的一个点的定点突变技术，其它较长片段的突变，删除，插入技术以后会慢慢奉上：在做实验之前，我们首先要搞清楚实验的目的和实验的原理。实验的目的应该比较明确吧：就是要把自己的基因上面的一个碱基换成另外一个碱基。一般情况下我们会有几种可能使我们需要这样去做：第一：我们吊出来的基因有点突变，相信这可能是大家经常会遇到的问题。基因好不容易吊出来，并装进了自己的载体，却发现有一两个碱基跟自己的预期 ...

耐药质粒 DNA转化实验　　本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。 　　　　【原理】　　受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四环素（Tc）基因，如将pBR322质粒转入到对上述抗生素敏感的Ecoli ...

耐药质粒 DNA转化实验　　本实验学习将质粒DNA分子转入大肠杆菌的方法及如何筛选带有质粒DNA的细胞克隆，即转化子。 　　　　【原理】　　受体菌Ecoli RRI 在低温条件下经Ca++ 处理，可改变细胞膜的通透性，利于受体菌对DNA的摄取，这种经Ca++ 处理的细菌称感受态菌。pBR322 质粒带有氨基苄青霉素（Ap）和四环素（Tc）基因，如将pBR322质粒转入到对上述抗生素敏感的Ecoli ...

一）酶切实验　　本实验学习用限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）EcoRI 切割λDNA及质粒pBR322DNA，琼脂糖凝胶电泳后观察酶切结果。 　　【原理】 　　λDNA 是大肠杆菌的一种温和噬菌体DNA，双股线状，分子大小为48.5 kb。 EcoRI酶可识别DNA中 G↓AATTC核苷酸序列，并在箭头处将其切开。λDNA含有5个EcoRI酶识别位点，可将λDN ...

一）酶切实验　　本实验学习用限制性核酸内切酶（Restriction endonuclease）EcoRI 切割λDNA及质粒pBR322DNA，琼脂糖凝胶电泳后观察酶切结果。 　　【原理】 　　λDNA 是大肠杆菌的一种温和噬菌体DNA，双股线状，分子大小为48.5 kb。 EcoRI酶可识别DNA中 G↓AATTC核苷酸序列，并在箭头处将其切开。λDNA含有5个EcoRI酶识别位点，可将λDN ...

（一）碱变性法提取质粒DNA 　　质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。　　分离和纯化质粒DNA的方法很多但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增，细菌菌体的 ...

（一）碱变性法提取质粒DNA 　　质粒(Plasmid) 是细菌染色体外能自身独立复制的双股环状DNA。带有遗传信息，可赋予细菌某些新的表型。将质粒指纹图谱分析方法、质粒DNA探针技术及检测质粒的PCR技术用于临床感染性疾病的诊断和流行病学调查已成为现实。质粒作为载体在基因工程中起着重要的作用。　　分离和纯化质粒DNA的方法很多但这些方法基本包括三个步骤：即细菌的培养和质粒DNA的扩增，细菌菌体的 ...

载体主要有病毒和非病毒两大类其中质粒DNA是一种新的非病毒转基因载体。一、一个合格质粒的组成要素复制起始位点Ori 即控制复制起始的位点。原核生物DNA分子中只有一个复制起始点。而真核生物DNA分子有多个复制起始位点。抗生素抗性基因 可以便于加以检测，如Amp+ Kan+多克隆位点MCS 克隆携带外源基因片段P/E 启动子/增强子Terms 终止信号加poly（ ...