DNA实验技术

指葫芦 我是一个初学者，要大量提质粒。发现实验室的离心机最高为4300rpm，可是说明书上要求13000rpm。想请问各位达不到说明书上的要求可以吗？再者，提质粒的时候不是都要低温吗？为什么说明书上说的是常温离心？望请大家帮忙帮忙，再此不甚感激！shylook 你用天根这样的kit做大抽的话因为不是考离心沉降质粒所以 我想 速度影响不大 你试试其他kit 4300rpm的话 你延长一倍时间也应该可以wwjsix 最好按照说明书来说。质粒抽 ...

hust_ggjj 第一次1%的胶，跑的图感觉不太好，所以换成0.7%的跑我觉得是dna没有提好，所以重提了一次，1%的胶第一次提dna,不知道经验，请高人指点，能不能去做pcr试试，可能是什么原因没有提出来，我的样品放在-80时间不长。。。skyhater 总dna电泳？什么目的？skyhater 这样的电泳无目的哇，p试试是可以的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

麦宝 老师有布置作业说要找一个简单DNA分子的酶切位点，要举个实例，请问怎么找啊....月中雨 DNAstar和PRIMER相关软件说明书说明很详细！！！yxx44 1、直接在网上分析，如neb公司的网络工具nebcutter,网址如下：http://tools.neb.com/NEBcutter2/打开网站，输入序列，提交,ok可以根据自己的需要选择结果显示2、直接用软件分析，如：DNAstart,primer 5,vector NTI等等3 ...

lixingliang1987 本人最近小提质粒，挑取单克隆于3毫升LB培养基培养6小时候抽质粒，发现浓度只有50纳克每微升。后来重新挑取单克隆于10毫升LB培养基培养14小时，收集10ml菌液进行离心，裂解，上柱（10ml菌液只上一个柱子，量绝对足够了吧），结果浓度才300纳克每微升，我本计划下步做转染，如此低得浓度我很是担心啊不知道大家有没有遇到过此情况。我用的是pEGFP-N2质粒，是高拷贝的。PS：我怀疑是不 ...

lixingliang1987 本人近日构建克隆，送公司测序。得到序列结果进行DNAMAN分析，发现和目的基因相比多出两个碱基，我随后查看测序峰图，发现峰图上并没有相应的碱基，询问过公司后，他们建议按照峰图来分析结果。像这种拼接序列和峰图序列不同的现象，不知大家平时经常遇到吗？shylook 1.峰图有的 才能有 请确认是否真的没有多出俩碱基确认后打电话给公司 两边都打开峰图 确认一下如果确实没有 即声讨不负责任 不付款 找另外的公司再测2.真 ...

doctorchihlee 大家好，请问一下空白载体（含GFP,但不含靶基因）成功转染哺乳动物细胞后，荧光显微镜下观察GFP，观察到细胞全部呈绿色还是仅仅外周发光或是核发光？谢谢！doctorchihlee GFP在细胞质，是全部发光？！？real_madrid_146 这个是我用pEGFP-C2转HEK293的图。shylook 就是这样的济南基美 全部发光，GFP由于比较小，会有部分可以进入细胞核，有文献报道过本文由丁香园论坛提供， ...

happy0coral 哪位大侠能告诉我用pre-miR转染是属于瞬时还是稳定转染啊，另外是不是只要是转染就叫miRi啊sxj_fish 很多基因都是可以转染的　，ＤＮＡ也可以转染，还有ＳＩＲＮＡ也是可以转染的芍药香 可以选用瞬时转染也可以选用稳定转染，不过现在microRNA的前体转染大多是瞬时的。转染只是实验方法，应用于多种核酸的转入。artneer pre-miRNA是属于瞬转，因为转染miRNA的成熟序列很多情况下效果 ...

zjf0709 左侧的是提取的PUC18质粒，中间的marker不太好（可以忽略），右侧的marker是DL2000，由于跑得时间过长所以marker跑散了，右侧DL2000最上面的一个条带是2000bp，PUC18的序列是2686bp，为什么会跑的比2000bp还快？这个现象正常吗？是不是超螺旋的问题？请大家帮忙解答，谢谢！！！zjf0709 自己顶一下，请大家帮忙看一看。济南基美 是超螺旋的质粒，所以跑的快。一条带，说明都是 ...

linjl010 各位专家，我构建了一个表达载体，大小接近9K，目的是想验证猪的该基因表达情况，所以可以转染哪几种细胞，希望用一种转染效率高的细胞。谢谢大家！shylook hela咯章信来 293也成的本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

cpumxl 我现在想让公司帮我全合成所要表达蛋白的核酸序列，这个序列是在NCBI中找到的mRNA序列中的CDS区（不知道这样做可不可以），合成的序列要在大肠杆菌中表达，那么这个CDS区中的核酸序列要不要先优化成大肠杆菌偏爱性密码子再去合成啊？谢谢！qing0831 jiawo qq2582634920济南基美 最好要优化。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙 ...

whm5869 我构建了一个质粒，包括目的基因片段和一小段启动子，测序结果完全正确，我们实验室的工作人员说理论上应该表达但是我转染细胞做WESTERN鉴定，就是不表达，请问这是为什么啊，谢谢各位大侠了whm5869 我用的是polyjet转染试剂，操作等基本没问题，谢谢大家了pharmaceutic 以前我站构建质粒的时候也遇到过这种问题，最后换了一个载体以后就表达了。最后分析认为不同的基因可能有启动子喜好，一般情况下 ...

huazhan5 有没有自制探针的？而不是去买已经合成好的探针。。。希望可以交流哈~huazhan5 有没有人啊~帮帮我啦。biolinkphilic 可以看看这张帖子http://www.dxy.cn/bbs/thread/13765082其实做探针的进口试剂费用也不便宜。国内现在也有公司可以合成。huazhan5 biolinkphilic wrote:可以看看这张帖子http://www.dxy.cn/bbs/thread/137650 ...

cssc 如题，一个肿瘤患者，用他的肿瘤组织DNA和血液样本DNA测序时，两者所得的序列是否应该一致的？谢谢！bigbang_0_0 不是完全一致的，肿瘤细胞存在基因组不稳定的特点，易积累体细胞突变。而血液细胞多由造血干细胞分化得来，除非造血干细胞本身发生癌变，其基因组应该与胚胎时期的基因组是一致的。cssc 谢谢啊，感谢帮助！华因康基因公司 有些基因是是存在体细胞突变的，这些体细胞突变一般发生在肿瘤细胞中，所以肿瘤组织中突变比 ...

buding2008 最近做实验，想要个假基因，请问各位有没有做过它可以在什么 组织或者细胞上表达。大家畅所欲言，假基因到底表不表达，到底有没有功能。yuandong 有些有功能。waterbeijing 可能有功能，记得以前看过一篇文章说假基因的RNA跟可以编码的mRNA竞争miRNA本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shixiongcoming

木瓜奶茶 请问基因定点突变能一次性突变两个基因吗？我准备把GAC突变成CAG。还是得一个一个地突变？zhujoker 单个可以，一起也可以的木瓜奶茶 谢谢啊！ziyikeer 你是用试剂盒还是自己做啊？推荐一个试剂盒给你Easy Mutagenesis system。不过你要设计好引物，引物设计可以自己看说明书。本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：shix ...

chenlimei518 请教各位老师们：本人今天上午9：00做慢病毒转染肠癌贴壁细胞（SW620、HCT116），结果今晚6：00去换液观察一下细胞，其中有几个孔细胞死了很多，仅在孔边缘存活几个，有些孔细胞比较多。请老师们帮忙指导。谢谢！具体步骤如下：慢病毒包装：一、1D接293T细胞于6孔板中，undefined10 6/孔二、2D采用3质粒系统包装，12小时换液（1640+10%FBS）三、36小时收病毒，用0.22mm过滤，备用转染SW6 ...

chenguooo 各位大侠，小弟马上要做慢病毒尾静脉注射，想转染肝脏血管内皮细胞，想知道一只BALB/C小鼠要注射多少量？转染效率有多少？查不到类似的文献参考体内肝脏血管内皮好转吗？我的慢病毒滴度是undefined108TU/ML，来自上海英为信公司。谢谢！zhujoker 慢病毒滴度是undefined108TU/ML 打活体滴度太低，效果可能不会好chenguooo 我准备一只打300ul，那么一只就是1.undefined108TU，滴度再高的话，公司说滴度再高的 ...

xuquan897 求教一个关于测序的问题：我的大概1000bp左右的质粒拿去测序公司做正反向测序，结果正向测的很好，而反向给的报告是双峰，结果见下图，不知道是什么原因呢？请教各位高手。多谢多谢！file:///C:\Documents and Settings\yuanyuan.xu\Application Data\Tencent\Users\183410312\QQ\WinTemp\RichOle\%`GN))OT@@(C005`91(Y` ...

shinesnowing 想构建一个能通过接合作用进入野生型弧菌并在其中表达外源基因的质粒，现在找到一个名为pBOR8的质粒，只有质粒简图，没找到全序列，质粒上的元件为ori R6K、mob RP4、Ap、lacIq，如下图:现有两个问题想请教各位高人（1）该质粒能否直接作为表达载体，将外源基因克隆到该质粒上，如果可以通常外源基因应该克隆到哪个位点？（2）如果不能直接进行外源基因克隆和表达，那么应该如何进行改造？烦请各位不吝赐 ...

443201299 吉玛的shRNA质粒怎么样??吉玛的shRNA质粒最便宜，但不知道它的质量如何，有谁用过吗？感觉质量怎么样？西厢蔷薇 买过几次，一般吧。443201299 下调效率怎么样？？shylook 还是不错的443201299 吉玛的shRNA质粒载体好像是最便宜的！西厢蔷薇 我那个基因本来就是抗外源基因的，所以下调的比较差，买了两次，有一个下调了25%左右华因康基因公司 吉玛的东西一般吧epdn 广州锐博的也不贵噢。akachan ...