DNA实验技术

Serial Analysis of Gene Expression (SAGE)SAGE is a powerful tool that allows the analysis of overall gene expression patterns with digital analysis. Because SAGE does not require a preexisting clone, it can be used to identify and quantitate new gene as well as know genes. cDNA/AFLP (CWB Bachem)T ...

据《科学时报》2007年1月5日报道：由西北农林科技大学博士生导师王跃进教授主持完成的国家转基因植物研究与产业化开发专项“中国葡萄属植物野生种抗白粉病基因克隆”研究项目，经过6年的探索研究，近日在陕西杨凌通过了国家教育部组织的鉴定。与会专家一致认为：该课题针对世界葡萄生产中存在的问题，综合采用现代分子生物学技术，以我国特有的高抗白粉病的中国葡萄属野生种华东葡萄白河-35-1为材料，在抗白粉病基因克隆与功能分析、 ...

抗原提纯与动物免疫 　　对抗原的要求是纯度越高越好，尤其是初次免疫所用的抗原。如为细胞抗原，可取1×107个细胞作腹腔免疫。可溶性抗原需加完全福氏佐剂并经充分乳化，如为聚丙烯酰胺电泳纯化的抗原，可将抗原所在的电泳条带切下，研磨后直接用以动物免疫。　　选择与所用骨髓瘤细胞同源的BALB/c健康小鼠，鼠龄在8～12周，雌雄不限。为避免小鼠反应而不佳或免疫过程中死亡，可同时免疫3～4只小鼠。　　免疫过程和方法与多克隆抗血清制备基本相同，因动 ...

PCR克隆主要有TA克隆法, 限制性酶切与连接法，杂交法和近期开发出来的特异性重组法等。但因为TA克隆法操作最简单，快速和高效的原因，成为Taq聚合酶PCR产物的最佳克隆方法。TA克隆法由Invitrogen发明，并拥有全球TA Cloning商标的专利权。TA克隆方法（Original TA Cloning Kit）利用Taq聚合酶同时具有的末端连接酶的功能，在每条PCR扩增产物的3`端自动添加一个3`-A突出端。Invitro ...

单拷贝克隆产量低，高拷贝克隆稳定性差，一直让研究者在克隆表达时难以选择。蛋白的表达就有诱导表达系统，可以实现人为地控制蛋白的表达时间和表达量——现在连质粒的拷贝数可以借助诱导的方法来人为控制了！Epicentre的专利技术——CopyControl克隆系统能够让您共享单拷贝和高拷贝的优点。CopyControl克隆首先以单拷贝形式生长——单拷贝可以确保插入稳定及成功克隆编码毒性基因序列——在需要的时候，再诱导成 ...

科技日报2006年10月9日讯 美国科学家新近用一种完全成熟的体细胞——粒细胞克隆出小鼠，这是世界上首次使用处于终极分化状态的体细胞培育出哺乳动物。 　　 这项研究由康涅狄格大学、匹兹堡大学和耶鲁大学医学院等机构的科学家共同完成，由华人科学家杨向中和程涛领导。研究证明体细胞的克隆潜力比成体干细胞更大，并为克隆羊多利身份的真实性提供了进一步依据。 人们以往认为，成体干细胞具有一定的分化潜力，用它来克隆动物比使用分化后的体细胞效 ...

最近美国科学家表示他们利用已经分化的细胞作为细胞核供体，发明了一种一步式体细胞核克隆技术。 Connecticut大学的科学家们表示，他们的研究表明利用完全分化的粒性白细胞能比利用未分化的造血干细胞更有效的得到克隆的小鼠胚胎。 体细胞核移植技术指的是将细胞核供体的核取出，然后植入去核的卵细胞中的过程，通过这一过程可以得到克隆动物。之前的报道表明，利用分化的体细胞克隆小鼠只能通过两步过程实现，第一步是用体细胞核移植 ...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接）简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μL ，要切出小片断的质粒B酶切7μL；琼脂糖回收胶电泳；切胶回收来自质粒A的大片段，和来自 ...

浙大求是新闻网2006年10月12日报道：10月9日上午，浙江大学动物预防医学研究所于涟教授主持的浙江省重大科技攻关项目“新型免疫佐剂鸡白细胞介素2的克隆、表达及应用研究”，通过了省科技厅主持的成果鉴定和项目验收。 新型免疫佐剂的研制与开发是当代新疫苗研究中的一个非常重要领域。经过多年的刻苦攻关，于涟教授带领的课题组成功克隆了我国地方品种萧山鸡白细胞介素2（ChIL-2）基因，并对基因结构进行了分析，这是国内在Ge ...

Assay Design for MIP GenotypingDescription: For each SNP a single MIP probe is designed. A minimum of 5000 probes are designed as a probe set.1) MIP probe designTwo homologies are designed that abut, but do not overlap the SNP. The tag sequence, two primer sequences and a restriction sequence are added to ...

Perlegen Assay Design ProtocolDescription: Long-range PCR assays were designed using Oligo primer design software(Molecular Biology Insights). Primers were selected to have similarstringency and to map uniquely to NCBI Build 33. From a collection ofall suitable candidate pri ...

限制性内切酶综述(Restriction Endonucleases: An Overview)30多年前，当人们在对噬菌体的宿主特异性的限制-修饰现象进行研究时，首次发现了限制性内切酶。细菌可以抵御新病毒的入侵，而这种"限制"病毒生存的办法则可归功于细胞内部可摧毁外源DNA的限制性内切酶。首批被发现的限制性内切酶包括来源于大肠杆菌的EcoR I和EcoR II，以及来源于Heamophilus influenzae的Hind II和H ...

SNPs概念(single nucleotide polymorphism ， SNP，发音为“snips”), 主要是指在基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的 DNA 序列多态性。它是人类可遗传的变异中最常见的一种。占所有已知多态性的 90% 以上。 SNP 在人类基因组中广泛存在，平均每 500 ～ 1000 个碱基对中就有 1 个，估计其总数可达 300 万个甚至更多。 SNP 所表现的多态性只涉及到单个碱基的变异，这种变异可由单个碱基的转换 (transition) 或颠换 (transvers ...

基因工程:有目的的通过分子克隆技术，人为的操作改造基因，改变生物遗传性状的系列过程。载体:能在连接酶的作用下和外源DNA片段连接并运送DNA分子进入受体细胞的DNA分子。转化:指质粒DNA或以它为载体构建的重组DNA导入细菌的过程。感染:以噬菌体、粘性质粒和真核细胞病毒为载体的重组DNA分子，在体外经过包装成具有感染能力的病毒或噬菌体颗粒，才能感染适当的细胞，并在细胞内扩增。转导:指以噬菌体为载体，在细菌之间转移 ...

SNP 检测方法及研究现状 SNP 是指基因组水平上由单个核苷酸的变异所引起的DNA 序列多态性,在群体中的发生频率不小于1 %。包括单个碱基的转换、颠换、插入和缺失等。所谓转换是指同型碱基之间的转换,如嘌呤与嘌呤( G2A) 、嘧啶与嘧啶( T2C) 间的替换;所谓颠换是指发生在嘌呤与嘧啶(A2T、A2C、C2G、G2T) 之间的替换。依据排列组合原理,SNP 一共可以有6种替换情况,即A/ G、A/ T、A/ C、C/ G、C/ T 和G/ T ,但事实上,转换的发生频率占多数,而且是C2T 转换为主, ...

SNP 研究相关概述 SNPs是指DNA序列上发生的单个核苷酸碱基之间的变异,在人群中这种变异的发生频率至少大于1%, 它是基因组中存在的一种数量非常丰富的变异形式,占人类基因组中遗传多态性的90％以上。针对不同人种基因组的测序结果表明,在人类群体中存在大约1000万个SNP位点,在公共数据库中至少有500多万个SNPs已被报道,SNPs在基因组的分布密度达到每300-500个碱基就存在一个SNP。1. SNPs检测技术的进 ...

一．Pyrosequencing技术用于炭疽热细菌的鉴定： 以下方案指出了以前用于炭疽热细菌鉴定方案的局限性，这些方案有抗体检测的诊断方法， 16S rRNA基因的序列分析， DNA杂交， gamma phage sensitivity tests和carbohydrate profiles等。该方案肯定了利用pyrosequencing鉴定细菌的优势。鉴定炭疽热细菌Bacillus anthracis的最新方案利用PSQ 96 DNA分析系统，基于D ...

测序（sequencing）技术 在分子生物学研究中，DNA的序列分析是进一步研究和改造目的基因的基础。目前用于测序的技术主要有Sanger等（1977）发明的双脱氧链末端终止法和Maxam和 Gilbert（1977）发明的化学降解法。这二种方法在原理上差异很大，但都是根据核苷酸在某一固定的点开始，随机在某一个特定的碱基处终止，产生A，T，C，G四组不同长度的一系列核苷酸，然后在尿素变性的PAGE胶上电泳进行检测，从而 ...

基因克隆的常用方法基因(gene)是遗传物质的最基本单位,也是所有生命活动的基础。不论要揭示某个基因的功能,还是要改变某个基因的功能,都必须首先将所要研究的基因克隆出来。特定基因的克隆是整个基因工程或分子生物学的起点。本文就基因克隆的几种常用方法介绍如下。 　　1　根据已知序列克隆基因 　　　　对已知序列的基因克隆是基因克隆方法中最为简便的一种。获取基因序列多从文献中查取,即将别人报道的基因序列直接作为自己克隆的依据。现在国际上公开 ...

Growth and storage of Agrobacterium tumefaciens(农杆菌培养及转化)Strain GV3101: resistant to gentamycin and rifampicin so add 25-50 ug/ml Gentamycin, 10 ug/ ml rifampicin on plates or in liquid media for selection. GV3101 is sensitive to kanamycin (or chloramphenicol), so is a good strain for use w ...