DNA实验技术

一、引言 水稻是世界上重要的粮食作物之一，负担近35 亿人口的粮食需求，是全球二分之一人口的主食。根据估计到了公元2050年全球的人口总数预计会大幅成长7.5-10.5亿，而这些新增人口主要集中在以稻米为主食的地区。根据2009年联合国世界粮农组织(FAO)的报告推估，到了公元2050年全世界的粮食生产，和现在相比，可能要产出额外70%的粮食，来喂饱这些新增的人口，可以想见，稻米的生产在不久的未来，是维持粮食安全的重要指标。 ...

细胞：1.选择适当的细胞接种浓度。一般情况下，96孔培养板的一内贴壁细胞长满时约有105个细胞。但由于不同细胞贴壁后面积差异很大，因此，在进行MTT试验前，要进行预实验检测其贴壁率、倍增时间以及不同接种细胞数条件下的生长曲线，确定试验中每孔的接种细胞数和培养时间，以保证培养终止致细胞过满。这样，才能保证MTT结晶形成酌量与细胞数呈的线性关系。否则细胞数太多敏感性降低，太少观察不到差异。2.药物浓度的设定。一定要多看 ...

FuGENE6（Roche）转染步骤：转染前一天将细胞分至培养板，转染当天细胞应50-80％融合。将细胞以1-3×105/2 ml接种于6孔板后孵育过夜将达到如此密度。将FuGENE6 Reagent在室温孵育10-15分钟。使用之前将FuGENE6颠倒混匀一下。1. 在PCR管中加入不含血清和双抗的营养液以稀释FuGENE6，直至总体积到100 ul。2. 将3-6 ul FuGENE6 Reagent直接加入营养液，轻弹管壁混合。3. 加入1-2 ug的 ...

基因工程（DNA重组技术）是在离体条件下对不同生物的遗传物质（DNA）进行人为“加工”，并按照人们的意愿重新组合，以改变生物的性状和功能，然后再通过适当的载体将重组DNA转入生物体或细胞内，并使其在生物体内或细胞中表达，从而获得新的生物机能。这种利用基因工程技术获得的植物一般称为“基因工程植物”。自1983年首次获得转基因植物以来，便深受育种工作者青睐，得到了蓬勃地发展。至今已有30多科约200多种植物转基因成功； ...

原位杂交技术应用于染色体、细胞和组织切片等样品中进行核酸特异性检测，与免疫组化技术的结合应用，能将DNA、mRNA和蛋白水平上的基因活性与样品的显微拓扑信息结合起来。1969年Pardue和Gall将放射性标记的探针直接应用于纯化核酸的杂交，此后得益于分子克隆技术的发展，及不同探针标记系统和检测系统的应用，大大增加了原位杂交检测的应用灵活性和检测灵敏度。多种探针标记检测系统基于地高辛、生物素和荧光标记分子的 ...

结论：一定要选择具有相同buffer的两个酶技术背景：克隆目的基因，并把其装入表达载体转化/转染原核细胞/真核细胞中，是获取目的蛋白/研究基因功能的经典方法，也是目前科研工作者常用的方法。其中酶切是该技术不可缺少的一部分，随着载体设计技术的发展，双酶切以其独特的优点而逐渐取代了单酶切 。具体实验流程如下：设计合成含有酶切位点，能扩增基因ORF全长的一对引物——PCR扩增目的基因——纯化PCR产物——分别对PCR产物及载 ...

对于经历了硕士、博士以及博士后磨练的前辈们，大家肯定都有自己的科研体会和实验技巧的窍门或者“绝活”，这些窍门有的可能是书本上学不到的。对于新入实验室的师弟师妹们来说，听听师兄师姐们的实验心得可以使自己更快进入科研角色，避免走很多弯路。形态学方法免疫组织化学实验对象：冰冻切片步骤1、室温下复温30min，0.01MPBS清洗5min×3；2、加入配好的0.3% Triton X100（30% Triton X100＋0.01MPBS 100 ...

小崔的转基因美国行的录像风传互联网：http://tv.sohu.com/20140301/n395869190.shtml小崔这个视频发布不久，微信群就有不少人在转发，可见影响不小。里面太多 he said she said，结果是怀疑者更怀疑了。有朋友批评小崔缺乏科学素养，以其昏昏，使人昭昭，水平不够。也许是吧。可小崔有新闻人的资格和耐力干劲，虽然缺乏科学理解能力。而某些据说有科学学养的人，又专门爱忽悠，欺负国内老百姓没在美国生活过 ...

最近两周在国内，听到议论最多的就是有关卫计委发通知叫停基因检测技术的临床应用的事：有关高通量测序产前诊断，我已经讨论过不少（参考下面的相关博文）。可是对卫计委的突然叫停，还是有些感受值得和大家分享。首先，我认为叫停是对的。既然国家有相关法律，就要按照法律程序办：公司应该按照程序报批产品。看上去这是一个很突然的决定，其实也是必然。卫计委也是无奈，他们多次交涉相关公司，两三年来一直被顶着。如果不管，一旦出事，责任就首先在 ...

测序都是从5'端进行的，正向和反向测序是指对DNA的两条互补链分别测序，通常两个方向测序结果经校读后完全一致才能认为得到可靠结果。生工测序结果一般都提供两个文档，一个是TEXT的序列文档，一个是用Chromas软件打开的ABI文档。1.寻找引物http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi 比对，去除引物序列，找到目的片段。在DNAMan上进行比对，看引物能不能比对上（一个不变，一个反向互补） ...

从基因组、转录组、表观基因组、调控组、宏基因组等各个生物层面上对生物体进行信息解读，是理解复杂生命机理的关键。新一代测序技术的飞速发展，为我们从各个角度观测生命系统提供了可能。新一代测序技术又称高通量测序，是对第一代DNA测序技术颠覆性革命，以2005年454公司推出基于焦磷酸测序技术的454测序仪为标志，代表着新一代测序技术的推广和应用。随后的2006年，美国Illumina公司进军新一代DNA测序市场，研发 ...

苹果前掌门人乔帮主离世两年多了，这位活着就为改变世界的天才在去世之前仍做了一件与他性格极其相符的事情：花费10万美元进行了一次全基因组测序。并对该技术抱有巨大期望：“我相信我会成为这家公司治愈的首批癌症患者之一，抑或是最后一批因为癌症而死亡的患者之一。”但由于治疗上的耽搁，该技术并未使得乔布斯从鬼门关返回。据乔布斯传记的作者艾萨克森透露，乔布斯当时是世界上仅有的20个完成个人基因组测序的人之一。技术的不确定性 ...

To assess a construct, such as anxiety, and to determine potential neurobiological underpinnings of this construct, it is often necessary to utilize an animal model. For example, the elevated plus maze is a widely used behavioral assay that has been validated to assess the anxiety-related beh ...

Helicobacter pylori is a Gram-negative bacterium that colonizes the gastric epithelium and plays a causative role in the development of peptic ulcers and gastric cancer. Phagocytosis is an element of innate defense used by macrophages and neutrophils to engulf microorganisms. We and o ...

Sperm vitality is a reflection of the proportion of live, membrane-intact spermatozoa determined by either dye exclusion or osmoregulatory capacity under hypo-osmotic conditions. In this chapter we address the two most common methods of sperm vitality assessment: eosin–nigrosin ...

细胞转染是将外源性分子如DNA，RNA等导入真核细胞内的专门技术，是研究基因表达调控，突变分析，基因沉默，蛋白质等的工具，目前已成为生物和医学等研究实验室广泛使用的基本技术。理想的转染方法具有转染效率高，对细胞毒性小，使用简便，适用范围广等特点。阳离子脂质体法是目前普遍应用的细胞转染方法，转染效率较高，对细胞有一定毒性，转染效果随细胞类型变化大。对于难以转染的细胞及原代细胞，病毒介导法是可供选择的方法之一，它通过 ...

前一阵子一直在做双酶切质粒重组，失败了 很多次，不过很快改善了 实验方法，用2周重组了 14个质粒。现就自己的体会，结合丁香园战友的宝贵经验，谈一下质粒重组的一些个人经验。1. 回收PCR产物在进行PCR扩增时候，给引物两端设计好酶切位点，一般说来，限制酶的 选择非常重要，尽量选择粘端酶切和 那些酶切效率高的限制酶，如BamHI、HindIII，提前看好各公司的双切酶所用公用的BUFFER，以及各酶在公用BUFFER里的效率。选好酶切位 ...

甲状腺是人体最大的内分泌腺体，呈薄薄的一层，位于甲状软骨下紧贴在气管第三，四软骨环前面，主要功能是合成甲状腺激素 ，维持生长发育、调节机体代谢，同时也与心血管和神经系统有关。甲状腺癌（thyroid carcinoma，TC）是甲状腺的恶性肿瘤，也是我国近年来发病率增长最快的实体瘤之一，特别是沿海地区已成为甲状腺癌的高发区。江苏部分地区进行的流行病学研究发现，16 岁以上调查人群中甲状腺结节患病率为17. 9% ~22. 5%，女性患病率 ...

病毒载体在生物医学的基础研究和产品开发中具有重要作用，细胞转染是制备病毒载体的关键步骤。然而现有转染试剂价格昂贵、操作繁琐，已成为快速、高效和大规模制备病毒载体的限制因素。QuickShuttle系列转染试剂是由北京康碧泉生物科技有限公司研发的一类具有自主知识产权、独特配方的阳离子型转染试剂，具有高效、低毒和易于使用等优点。QuickShuttle区别于常规转染试剂的两个最主要特点是：（1）可以在细胞传代后尚 ...

The overall sequence of events is: • Titer and plate out phage • Lift plaques onto filters and prepare them for screening • Make a probe • Hybridize the probe to the filters • Wash the filters and expose to film • Purify putative plaques • Excise plasmid from the desired phage Some preparatory itemsThe library ...