DNA实验技术

1、进入NCBI主页：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/在search后面选择Gene，在for后面填写需要查找的基因的名字。如图所示：点击“Go”，出现以下界面：出现了很多基因序列，在每个序列的右边还有“Order cDNA clone” 的链接，这些序列中有些序列是跟你的目的基因同名的，有些是别名（Other Aliases）与你的目的基因一致，根据每个序列的介绍认真选择你的目的基因。上图中我需要的IL6是标号为 ...

下面以人的IL6（白细胞介素6）为例讲述一下具体的操作步骤一、打开Map viewer页面，网址为：http://www.ncbi.nlm.nih.gov/mapview/index.html在search的下拉菜单里选择物种，for后面填写你的目的基因。操作完毕如图所示：二、点击“GO”出现如下页面：.三、在步骤二图示的右下角有一个Quick Filter,下面是让你选择的几个复选框，在Gene前面的小方框里打勾，然后点击Fil ...

高通量测序技术是对传统测序一次革命性的改变，一次对几十万到几百万条DNA分子进行序列测定，使得对一个物种的转录组和基因组进行细致全貌的分析成为可能，所以又被称为深度测序(deep sequencing)。自从2005年454 Life Sciences公司（2007年该公司被Roche正式收购）推出了454 FLX焦磷酸测序平台（454 FLX pyrosequencing platform）以来，曾推出过3730xl DNA测序仪（373 ...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。）一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接）简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μL ，要切出小片断的质粒B酶切7μL；琼脂糖回收胶电泳；切胶回收来自质粒A的大片段，和来自 ...

λ噬菌体是最早使用的克隆载体，λ噬菌体的基因组是一长度约为50kb的双链DNA分子，它在宿主细胞有两种生活途径，其一是裂解生长，环状DNA分子在细胞内多次复制，合成大量噬菌体基因产物，装配成噬菌体颗粒，裂解宿主菌再进行下一次感染；其二是溶源性生长，即感染细胞内λ噬菌体DNA整合到宿主菌染色体DNA中与之一起复制，并遗传给子代细胞，宿主细胞不裂解。平板培养时，裂解生长形成噬斑。液体培养时，裂解生长使菌液中宿主菌最 ...

质粒、噬菌体等经酶切，电泳；PCR产物经电泳后，常常需要对一些DNA电泳片段进行回收和纯化，用于亚克隆、探针标记等。DNA回收和纯化常用方法有压碎法、低融点琼脂糖法、冻融法等，也有现成的试剂盒供应。一、冻融法1. 紫外灯下仔细切下含待回收DNA的胶条，将切下的胶条（小于0.6g）捣碎，置于1.5ml离心管中；2. 加入等体积的Tris-HCl饱和酚（pH 7.6），振荡混匀；3. -20℃放置5-10min；4. 4℃离心10000g×5min，上层 ...

制备基因组DNA是进行基因结构和功能研究的重要步骤，通常要求得到的片段的长度不小于100-200kb。在DNA提取过程中应尽量避免使DNA断裂和降解的各种因素，以保证DNA的完整性，为后续的实验打下基础。一般真核细胞基因组DNA有107-9bp，可以从新鲜组织、培养细胞或低温保存的组织细胞中提取，常是采用在EDTA以及SDS等试剂存在下用蛋白酶K消化细胞，随后用酚抽提而实现的。这一方法获得的DNA不仅经酶切后 ...

腺相关病毒（Adreno-Associated Virus, AAV）是微小病毒科（Parvoviridae）家族的成员之一。这一家族成员是一类微小、无被膜及具有二十面体结构的病毒。病毒颗粒的直径在20～26nm之间，含有大小在4.7~6kb之间的线状单链DNA基因组。它的复制和增殖依赖于辅助病毒的存在。

随着高通量测序技术的不断崛起，全基因组测序也逐步普及。越来越多的物种基因组予以公布。目前，主要有两种获得研究物种参考基因组的策略：de novo 基因组拼接和基于mapping算法的基因组序列修正，mapping是指将所有测序读段通过序列比对定位到参考基因组上。De novo基因组拼接是利用短读序列（reads）组装出一个基因组草图，然后通过自动注释标出可能的开放阅读框（open reading frame, ORF）。然而现行的测序 ...

生命活动丰富多彩、千变万化。但是万变不离其宗，不管如何变化都围绕着中心法则展开。核酸作为遗传物质指导蛋白质的表达，表达产生的一些特殊蛋白（如转录因子、调控蛋白）反过来又对DNA指导合成蛋白质的过程进行调控。对基因表达调控的研究一直是生物学研究热点，涉及到生命活动的各个过程，也是各类信号通路研究无法绕过的部分。当面对某个基因表达调控研究时，第一个想到的研究对象是什么？没错，就是基因的启动子。通过启动子区域对基因表达 ...

常用的高通量基因和蛋白检测方法包括表达谱芯片、microRNA芯片、二代测序、蛋白质谱及代谢组学分析（2-D、MALDI-TOF-MS、iTRAQ），充分利用这些方法和工具能够起到事半功倍的效果，加速研究进程。仪方生物会陆续推出一系列关于上述技术的案例介绍说明，希望能够为对高通量技术感兴趣的研究者提供有益的帮助，了解技术进展和具体应用，从而掌握相关的技术思路和方法。miRNA（microRNA）表达谱芯片应用案例和 ...

阳性克隆筛选方法汇总——基于ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9基因敲除方法近几年来，基因重组的技术层出不穷，包括TALEN和CRISPR/Cas9在内的重组技术给基础研究提供更为方便和快捷的分子生物学工具。关于这些技术的具体原理和操作细节，这里不做展开介绍，主要谈一谈在用这些技术进行细胞株构建的过程中，如何做才能加快阳性克隆筛选的步伐。阳性克隆筛选的过程为：将单个细胞，采用有限稀释法接种到96孔板中，待到 ...

摘要骨髓间充质干细胞（MSC）为组织工程学和再生医学带来重大希望。临床及临床前对MSC的应用需要它们在培养基中以最大效率扩增，并且维持分化为主要细胞系的能力。胎牛血清（FBS）是一种体外维持hMSC生长的要素，但是批次之间的差异能明显影响实验结果。为了制造能始终如一地使hMSC最优扩增的生长培养基，我们测试了几种来源的FBS的不同浓度。我们的结果表明FBS样品间的扩增效率差异很大，一次传代后可扩增1.8至4.2 ...

中国作者撰写英语论文中的一些常见问题——STYLE, GRAMMAR, PUNCTUATION, AND OTHER ISSUES（美国LetPub编辑: SCI论文写作系列16）1、逗号误用：逗号误用是指两个独立单句（即每个句子都可以是一个单独的完整句子）间只用逗号相连。独立单句可使用适当连接词（例如：and、but）或用分号隔开；或使用句号取代逗号，并开始新的句子。2、先行词(antecedent)不清晰：：我发现很多个句子中，代词(pron ...

通过本实验学习琼脂糖凝胶电泳检测DNA的方法和技术。DNA分子在琼脂糖凝胶中泳动时有电荷效应和分子筛效应。DNA分子在高于等电点的pH溶液中带负电荷，在电场中向正极移动。由于糖-磷酸骨架在结构上的重复性质，相同数量的双链DNA几乎具有等量的净电荷，因此它们能以同样的速度向正极移动。在一定的电场强度下，DAN的迁移速度取决于分子筛效应，即DNA分子本身的大小和构型。具有不同的相对分子质量的DNA片段泳动速度不 ...

通过本实验学习和掌握碱裂解法提取质粒碱裂解法提取质粒是根据共价闭合环状质粒DNA与线性染色体DNA在拓扑学上的差异来分离它们。在pH值介于12.0-12.5这个狭窄的范围内，线性的DNA双螺旋结构解开而被变性，尽管在这样的条件下，共价闭环质粒DNA的氢键会被断裂，但两条互补链彼此相互盘绕，仍会紧密地结合在一起。当加入Ph4.8的乙酸钾高盐缓冲液恢复pH至中性时，共价闭合环状的质粒DNA的两条互补链仍保持在一起 ...

一、PBMC精确计数和活性分析的重要性外周血单个核细胞（PBMC）在免疫学、传染病、肿瘤学、干细胞移植、恶性血液肿瘤以及疫苗开发等领域被广泛的研究，尤其是在免疫学领域，PBMC细胞被用来监测在不同患者之间的免疫功能，其监测浓度、活力、增值、细胞因子的功能，对于临床试验和细胞医学研究都是是至关重要的。PBMC通常从分离于全血或者采集于病人的脐带血，这个过程就需要使用淋巴细胞分离液从血浆，血小板，和红细胞（RBC）中分离 ...

最近，日本东京大学研究者在Nature上发表论文，公布了他们关于家蚕性别决定的最新进展。在论文中，研究者描述了他们所发现的一个piRNA—FempiRNA，并详细阐明了该piRNA的来源及其在家蚕性别决定机制中的关键作用。不同于哺乳动物，家蚕的性染色体为WZ型，雄性有两个Z染色体，而雌性则有一个W染色体，一个Z型染色体。家蚕的性别决定是在胚胎形成早期完成的，之前的研究已经发现，W染色体决定胚胎是否会发育成雌性成 ...

手动移液器由来已久，绝大部分用户已经比较了解其用法。电动移液器在我国的普及程度远远不及手动移液器，致使许多用户对电动移液器认识不深。通过以下的对比，加深了解两种移液器的使用方法及技巧。 手动移液器电动移液器使用步骤步骤一：装电池装吸头选择匹配的吸头，将移液器下端接接口垂直下压，左右旋紧吸头。切勿用移液器跺吸头，以免损坏移液器装好电池后，插吸头，步骤与手动移液器相同。新采购的电动移液器先充电，一般刚出厂的电池电量都不多 ...

基因组文库- 概述用限制性内切酶切割细胞的整个基因组DNA，可以得到大量的基因组DNA片段，然后将这些DNA片段与载体连接，再转化到细菌中去，让宿主菌长成克隆。这样，一个克隆内的每个细胞的载体上都包含有特定的基因组DNA片段，这样的一套克隆就叫做基因组克隆；其中克隆的一套基因组DNA片段就叫做基因组文库.将某种生物的基因组DNA切割成一定大小的片段，并与合适的载体重组后导入宿主细胞进行克隆。这些存在于所有重组体内 ...