DNA实验技术

祝贺MIT张锋研究组所取得的重要发现，并感谢他们选用来自Sellckchem的高质量产品。 自2013年以来，CRISPR/Cas9成为目前最热的基因编辑系统。MIT的科学家对CRISPR/Cas9进行了改造。现在，科学家可以用这一技术在细胞中有效启动任何基因，更简便地研究不同基因的功能。这一成果发表在2014年12月10日的Nature杂志上。领导这项研究的张锋（麻省理工学院脑与认知科学助理教授、McGovern ...

近日，上海交通大学生命科学技术学院、微生物代谢国家重点实验室在DNA磷硫酰化修饰研究方面取得新进展，由德林教授研究小组与美国麻省理工学院Peter C. Dedon教授课题组合作，博士生曹博为第一作者，在分子微生物学领域权威期刊《Molecular Microbiology》上发表研究性论文，揭示了DNA磷硫酰化修饰依赖的限制系统的作用机理，阐明了该限制系统完全不同于传统的甲基化修饰限制系统多方面作用特征。背景介绍DN ...

作者：中国人民解放军总医院 微生物科——罗燕萍 如果实验室不能通过确认该微生物而预测其药物敏感性，抗生素敏感性则是对引起感染的微生物进行抗生素化疗的有效指征。敏感性试验常可用来判断该病原体属于某一种对几种常用抗生素具有耐药性的细菌。 实验室可以用多种方法来衡量体外细菌对抗菌药物的敏感性。在许多临床微生物实验室，琼脂纸片扩散法常规用来检测常见、生长迅速和一些苛氧的细菌病原体。临床和实验室标准协会（CLSI）文件M02-A11 ...

胡云建，主任检验师，北京医院临床微生物室主任，中华检验医学杂志编委、协和医学杂志编委，卫生部实验室病原菌实验室生物安全评审专家，获卫生部科技进步二等奖一次，北京市科技成果三等奖二次，以第一作者或通讯作者发表文章60余篇，参加编写10本专著和2本译著。 摘要：对于血流感染患者需在治疗窗期间采取包括应用抗生素在内的适宜的治疗方案。血流感染治疗的最佳方案是首先经验应用广谱抗生素，再及时根据可靠的微生物和临床结果去调整治疗 ...

心肌缺血 心肌缺血是指心脏的血液灌注减少，导致心脏的供氧减少，心肌能量代谢不正常，不能支持心脏正常工作的一种病理状态。 血压降低、主动脉供血减少、冠状动脉阻塞，可直接导致心脏供血减少；心瓣膜病、血粘度变化、心肌本身病变也会使心脏供血减少。另外，心脏氧需求量增加，则引起心脏相对缺血。 资料显示，冠心病是引起心肌缺血最常见的病因。 心肌缺血会导致心肌受损，使心肌收缩功能下降，引起心肌不同程度的损伤。 如果心肌缺血被迅速纠正，则对远期预后的影 ...

阴道G-双球菌：镜检可见在一个平面上分裂成双排列的菌体 阴道霉菌（白色念珠菌）：镜检可以看到较多芽孢和细长的菌丝 线索细胞：镜检见到阴道上皮细胞边缘呈颗粒状或点状杆菌 聚集即为线索细胞，它是细菌性阴道病的最敏感最特异的体征，临床 医生根据胺试验阳性及有线索细胞即可做出细菌性阴道病的诊断。 阴道纤毛菌：镜检可见具尖端的许多细胞。二个或更多的细胞排列 在长度可变的无隔菌丝体中，长达200微米的丝状体彼此环绕着。

从2013年1月份开始到现在，近2年的时间里，CRISPR/Cas9技术的应用被来自全球优秀的科学家们不断的扩大。其中包括基因敲除，定点突变，定点整合，基因沉默，基因定位和CHIP等多个领域，而且这个技术的应用领域还在不断的被扩大。笔者基于多年的基因重组经验（系统的研究过ZFN/IOS/TALEN/CRISPR重组技术），以及采用CRISPR/Cas9技术构建超过50多个株系的经验，重点谈一谈构建敲除细胞株系时，如 ...

流式细胞术（flowcytometry，FCM）是一种综合应用光学、机械学、流体力学、电子计算机、细胞生物学、分子免疫学等学科技术，使被测溶液流经测量区域，并逐一检测其中每一个细胞的物理和化学特性，从而对高速流动的细胞或亚细胞进行快速定量测定和分析的方法。 首先，待测细胞经处理或染色后被压人流动室，与此同时，不含细胞的缓冲液在高压下从鞘液管喷出，鞘液管人口方向与待测样品流成一定角度，这样鞘液就能被包绕着样品高速流动，组 ...

DNA电泳的MARKER怎么是扭曲的？1、 配制胶时的缓冲液需要和电泳缓冲液不是同时配制的.最好是同时配制.电泳时缓冲液高过液面1－2mm即可。2、 电泳时电压过高,可以在电泳前15分钟用较低电压(3V/cm),等条带出孔后比较漂亮了.然后再调电压。3、 上样时尽量慢慢加样,等样品自然沉降后再加电压。跑出的DNA带模糊？1、DNA降解：避免核酸酶污染。2、 电泳缓冲液陈旧:电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而 ...

基因组DNA文库用途十分广泛，如用于人类及动植物基因组学研究，基因表达调控研究，分析、分离特定的基因片段等。通常情况下，基因组文库构建的基本流程可以归为四大步骤：分离基因组DNA、对基因组DNA作相关的处理、将基因组DNA片段连接入载体、将重组载体转入宿主细胞。一、分离基因组DNA（gDNA） 毫无疑问，高质量的。二、基因组DNA对于基因组文库构建是至关重要的。需要通过经验来选择合适的基因组DNA 分离方法，在分离 过程中保证 ...

做ChIP（Chromatin Immunoprecipitation）几个月，时间不长，但深刻体会细节决定成败，把自己认为值得注意的细节总结如下：1、cell counting：尽量做到准确，会影响input结果。2、cross link：甲醛的终浓度是1%，这个基本所有的protocol上都会强调。3、resuspend cells with SDS:一定要选用小的tip头，在液面下吹打，否则很容易产生气泡，后面的sonication就 ...

AFLP原理：AFLP也是通过限制性内切酶片段的不同长度检测DNA多态性的一种DNA分子标记技术。但AFLP是通过PCR反应先把酶切片段扩增，然后把扩增的酶切片段在高分辨率的顺序分析胶上进行电泳，多态性即以扩增片段的长度不同被检测出来。实验中酶切片段首先与含有与其共同粘末端的人工接头连接，连接后的粘末端顺序和接头顺序就作为以后PCR反应的引物结合位点。实验中，根据需要通过选择在末端上分别填加了1～3个选择 ...

学霸精选：2D电泳第一季第二集：蛋白质定量篇操作步骤详见视频视频本视频来自互联网

转录因子作为一种调控基因表达的关键蛋白，在很多研究中都是需要重点监测的对象。特别是对具有活性的转录因子的检测，有着重要的意义。转录因子的一个重要特点是在经过翻译后修饰及其它一些变化以后才具有发挥功能的活性。传统的测方法，如ELISA、Western Blot、荧光定量PCR等，都不能区分活化与未活化的转录因子，限制了这些方法在转录因子检测方面的应用。目前比较常用的是基于转录因子与特定DNA序列结合原理的凝胶迁移 ...

凝胶迁移实验有称凝胶阻滞实验或电泳迁移率实验（EMSA，electrophoretic mobility shift assay），是一种用于蛋白与核算相互作用的技术。最初是用于转录因子与启动子相互作用的验证性实验，也可应用与蛋白-DNA、蛋白-RNA互作研究。一、实验原理EMSA主要基于蛋白-探针复合物在在凝胶电泳过程中迁移较慢的原理。根据实验设计特异性和非特异性探针，当核酸探针与样本蛋白混合孵育时，样本中可以与核酸探针 ...

最近要做chip实验，不过是组织的。周围做chip的人不多，有几个做的也是做细胞的。于是到丁香园来搜索，结果只有提问的没有回答的。经过最近的摸索，终于找到了步骤。但进一步的实验还未摸索。在这儿把组织裂解成细胞的方法和步骤分享一下。本人英语水平有限，不保证完全准确。最后会给出原文的Protocol，供大家参考。因为做细胞chip的Protocol还是比较多的。组织裂解成细胞之后就可以按照细胞chip的Protoc ...

核酸抽提与纯化是分子生物学试验的基础，核酸纯化方法是影响提取核酸质量高低的最重要因素，也是下游分子生物学试验成败的关键。目前常见的核酸纯化方法有PC 抽提/醇沉淀方法、高盐沉淀蛋白质/醇沉淀方法、离心柱法和生物磁珠法，这几种方法各有其优势和劣势。一、PC抽提法PC 抽提是去除蛋白质有效的手段，但超过了该饱和度，裂解体系中的蛋白质不会被一次去除，必须靠多次抽提，方可彻底去除。且每次抽提都会损失部分核酸。另外，体系太粘稠的坏 ...

叶酸是什么叶酸（Folic acid）维生素B复合体之一，是米切尔（H．K．Mitchell，1941）从菠菜叶中提取纯化的，故而命名为叶酸。是合成核酸所必须的元素，是细胞生长和组织修复所必需的物质，更是胚胎发育过程中不可缺少的营养素。有“优生优育的营养素”美誉，对孕妇尤其重要。叶酸利用能力遗传检测的意义1、叶酸缺乏是导致出生缺陷的重要原因2、叶酸补充过量危害对叶酸的增补剂量并非越多越好。大量研究发现，过量补充叶酸会导致 ...

染色质免疫共沉淀测序（ChIP-Seq）是指对染色质免疫共沉淀（ChIP）获得的DNA片段进行大规模测序，并能把所研究蛋白的DNA结合位点精确定位到基因组上。Roche GS FLX Titanium 、Illumina Hiseq2000和AB SOLID 4 这3种测序技术均可以用于ChIP-seq，其中采用Illumina Hiseq2000进行ChIP-Seq已有较多文献报道。ChIP-Seq技术高质量、高通量、低成本的数据产出，为表观遗 ...

近年来，ZFN、TALEN、CRISPR/Cas9等基因组编辑技术可谓是层出不穷，尤其是CRISPR/Cas9，一出现便在全球范围内掀起一股热潮。同时，各大公司也开发出一系列相应的产品，其中一种至关重要的就是基因敲除阳性克隆筛选的试剂。目前，市面上只有Genloci的CruiserTM、Transgenomic的SURVEYOR和NEB的T7EI这三种产品和测序这种方法，被用于基因敲除阳性克隆的筛选。然而，SUR ...