DNA实验技术

问题 原因 解决办法DNA带模糊1) DNA降解避免核酸酶污染 2) 电泳缓冲液陈旧电泳缓冲液多次使用后，离子强度降低，pH值上升，缓冲能力减弱，从而影响电泳效果。建议经常更换电泳缓冲液 3) 所用电泳条件不合适 电泳时电压不应超过20V/cm，温度＜30℃；巨大DNA链电泳，温度应＜15℃；核查所用电泳缓冲液是否有足够的缓冲能力 4) DNA上样量过多 减少凝胶中DNA上样量 5) DNA样含盐过高电泳前通过乙醇沉淀去除过多的盐 6) 有蛋白污染 电泳前酚抽提去除蛋白 7) DNA变性 电 ...

1.SSCP的原理：http://www.dxy.cn/bbs/post/view?bid=67&id=761629&sty=3&keywords=sscp%D4%AD%C0%EDhttp://www.dxy.cn/bbs/thread/18311112.SSCP的相关资料http://www.dxy.cn/bbs/thread/18311113.SSCP的具体试验步骤http://www.dxy.cn/bbs/thread/1831147ht ...

这是我第3天小提质粒了，每次最后看到的都是可怜的沉淀，心里也特别难受，可是难受也没有办法，需要的是冷静的分析原因，于是打算进行质粒大提了，还要把所有的试剂都重新配制，包括ＬＢ培养基。可在此之前，我想请教一下，碱变性法提取质粒各位都有什么地方是特别注意的。为我的最后大提请愿，希望顺利。1、我自己觉得首先是心态问题，说实话，这个实验我已经做了无数次了，这次是最失败的一次，３天连提都失败，本来国庆想休息一下的，现在彻底无望 ...

支持版主工作，友情整理7月1日至8月15日的无人应助帖（不规范帖出外）。年代有点久远的帖子，请您回复时同时PM给求助者:)引用yaplewang战友的一句话：七、八月是应助的淡季，，，暑假嘛，呵呵，无人应助帖比较多哦，请大家积极应助！【求助】我提ＤＮＡ时出现的这种现象会不会与抗凝剂有关？拜托了，谢谢！！作者：yugang====================【求助】斑点杂交作者：sabinewen====================【求助】用G418筛选pc ...

做了快7年的分子克隆，从加样加不好，到现在轻松PCR，我想分子生物学这块还是有很多经验可以分享一下的。或许很多人会说分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，我认为连接的问题多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这步上。有很多环节影响连接的 ...

酵母相关网络资源 推荐一个关于酿酒酵母基因的网站protocols-online 送《Two Hybrid System-Methods and Protocols》 毕赤酵母操作手册 酵母双杂交系统flash动画 酵母双杂交实验常见疑难解答(转帖) 假丝酵母的基因组有没有完成测序？酵母培养 酵母基本氮源（YNB）到底哪里有卖啊？？？ 酵母中的振荡现象 酵母培养用YNB如何消毒？ 酵母培养时，如何抑制细菌生长？ 求HB101大肠杆菌菌株酵母DNA提取 酵母的基因组怎么抽提？ 请教 ...

名 称ADP全名（英） adenosine diphosphate全名（中） 二磷酸腺苷含义 名 称 AG全名（英） 8-azaguanine全名（中） 氮杂鸟嘌呤含义 名 称 AMP全名（英） adenosine-5'-monphosphate全名（中） 一磷酸腺苷含义 名 称 AO全名（英） acridine orange全名（中） 吖啶橙含义 名 称 APRT全名（英） adenine phosphoribosyltran-sferase全名（中） 腺嘌呤磷酸核糖转移酶含义 名 称 APT全名（英） aminopterin全名（中） 氨基蝶 ...

人类染色体姊妹染色单体差别染色姊妹染色单体区分染色法(Sister chromatid differentiation，SCD）是70年代中期发展起来的染色体处理技术。Latt（1973）在培养的细胞中加入5-溴脱氧尿嘧啶核苷（BrdU），当用Hoechst33258 荧光染料染色时，发现了姊妹染色单体的色差反映和它们之间互换的现象。1974年KO Renberg和Froeed-Lender改进了这一技术，建立了较简易的Brd ...

最近在做脉冲电泳，很感兴趣，本版战友wasteam曾于04年做过电泳方面的整理，其中提到过脉冲电泳，但当时有关帖子较少。现将后来的贴子重新整理，以便查找。 也希望版主能给予加分。PFGE（脉冲电泳）通常的琼脂糖凝胶电泳利用双链DNA 分子在电场作用下，在凝胶中的迁移率不同而达到分离的目的。当双链DNA分子超过一定的大小以后，DNA双螺旋的半径超过了凝胶的孔径，在琼脂糖中的电泳速度会达到极限，此时凝胶不能按照分子大小来筛 ...

一.Recommendations on how to handlethe clones you receiveThe clones you receive from us are shipped as bacterial LB agar stab culture.The DH10 E.coli host that is harboring the plasmid contains a DNA insert that has been placed into LB agar (containing 20 ug/ml chloramphenicol for BAC clones and 25 u ...

Southern印迹杂交（Southern blot）是1975年由英国人southern创建，是研究DNA图谱的基本技术，在遗传病诊断、DNA图谱分析及PCR产物分析等方面有重要价值。早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后，经毛细管的虹吸作用，转移到硝酸纤维膜上。印迹方法如电转法、真空转移法；滤膜发展了尼龙膜、化学活化膜（如APT、ABM纤维素膜）等。利用Southern印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱 ...

近日看了几位前辈关于翻译纠错的帖子，内容很分散，特此整理了一下，方便大家查看，内容不全，欢迎各位继续补充~~1.in the extreme elderlyThe researchers said their results show theneed for more aggressive prevention, diagnosis and treatment of osteoporosis inthis age group, referred to as the extreme elderly.in the extre ...

译者序近年来，我国生命科学和生物高技术领域的教学和科研正在迅猛发展，一支年轻的生物高科技教学和研究队伍正在茁壮成长。我国高校研究生教育亦形势喜人，招生数量逐年增加，招生专业和规模逐年扩大，许多知名大学都把以研究生教育和创新性科学研究为标志的高水平研究型大学定为奋斗目标。研究生队伍已成为高等学校中教学和科研工作中一支生机勃勃、不可替代的生力军。但是，目前我国高等学校(理、工、农、医院校)生命科学领域尚无一本系统的 ...

溴化乙锭EB净化和处理方法溴化乙锭EB净化和处理方法EB是我们从事生命科学尤其是分子生物学经常要接触的致癌性物质,且不好处理.现提供如下方法,供参考. 特别是刚走进实验室未生育的新同行,一定得学会保护自己呵,否则还涉及到下一代问题实验室中经常有EB被打翻或EB废弃物的处理问题，如何做到标准处理？1 严禁随便丢弃。因为EB是强致癌性，而且易挥发，挥发至空气中，危害很大。2 废 EB溶液的处理方法(1) 对于EB含量大于0.5mg/ml ...

俺开始做实验已经快两个月了，郁闷死了！！！郁闷的原因拟另外发帖求助。做实验过程中自己翻译的一点说明书，贴出来方便一下后面的战友！QIANGEN Plasmid Midi and Maxi Kits 试剂盒说明书QIANGEN Plasmid Midi and Maxi Kits 试剂盒最大推荐培养容量QIAGEN-tip100QIAGEN-tip500高拷贝质粒25ml100ml低拷贝质粒100ml500ml对QIAGEN-tip100，预期产量是75—1 ...

本版面公共邮箱已经收录:ng_dxy@163.com_____________________________________________Vector NTI User's Manual前言（INTRODUCTION） ....................................................................3第一章 DISPLAY WINDOWS..............................................................4一. 顯示DNA 序列及圖形........................................................... ...

1．目的学会从琼脂糖凝胶中回收DNA片段的基本技术。2．原理限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的DNA酶切片段。3．器材旋涡混合器，微量移液取样器，移液器吸头，1.5ml 微量离心管，双面微量离心管架，台式离心机，琼脂糖凝胶电泳系统，微波炉，水漂，恒温水浴 ...

1溶液配制:1.1 Buffer P1:(悬浮用)成分：50mM Tris.HCl, pH8.0, 10mM EDTA, 100ug/mL Rnase A配制：2M Tris.HCl, pH 8.025mL0.5M EDTA, pH 8.020mL双蒸水至 1L，灭菌。使用前每1L buffer加入100mg RNAse A，并于4℃保存。1.2 Buffer P2：（裂解用）成分：200mM NaOH, 1% SDS配制：8g NaOH固体溶解于500mL双蒸水中，成0.4M NaOH溶液10g SDS溶于500mL双蒸水中，成2% SDS ...

看到有很多人问质粒抽提的有关问题，恰巧手头上有一篇相关的文章　　　　　　　　　　　　　　　　 从质粒抽提谈起　　碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可以我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域 ...

Science：CRISPR热潮科学家们有望利用一种细菌免疫机制开发出革命性的新型基因组编辑技术（genome-editingtechnique）。细菌虽然不会对我们真核生物产生太多的同情之心，但是它们也的确是会生病的。而且细菌得病也不是和我们人类毫无关系的，至少就会对乳制品业带来很大的影响，因为在生产酸奶和奶酪的过程中都会用到嗜热链球菌（Streptococcusthermophilus）这样一类细菌。嗜热 ...