DNA实验技术

核酸基因版作为最热的基础医学版之一，战友们表现都比较热心。为发展本版的中坚及后备力量，繁荣本版，及方便大家以后晋级，专业不错的战友请到此自荐；同时加强交流学习，增进感情，共同提高！凡在本版已发50帖且得分10分以上的战友,为核酸版中坚人才,加1分鼓励.我们拟邀请这些战友参加本版的聚会或网络会议等活动.在此跟帖的战友,当达到上述条件时,自动升为中坚人才，同时加分鼓励。以下列格式进行：①用户名②简单介绍(年级专业及研究方向 ...

好久没有来发帖了。今日偶然看到一个小tips。帖出来和菜鸟分享。1．溶液I—溶菌液：溶菌酶：它是糖苷水解酶，能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-1,4糖苷键，因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时，溶菌酶作用受到抑制。葡萄糖：增加溶液的粘度，维持渗透压，防止DNA受机械剪切力作用而降解。EDTA：（1）螯合Mg2＋、Ca2＋等金属离子，抑制脱氧核糖核酸酶对DNA的降解作用（DNase作用时需要一定的金属离子作辅基） ...

质粒提取的原理因为觉得对新人很重要，所以再转贴一次。碱裂解法从大肠杆菌制备质粒，是从事分子生物学研究的实验室每天都要用的常规技术。可是我收研究生十几年了，几乎毫无例外的是我那些给人感觉什么都知道的优秀学生却对碱法质粒抽提的原理知之甚少。追其原因，我想大概是因为《分子克隆》里面只讲实验操作步骤，而没有对原理进行详细的论述。这是导致我的学生误入歧途的主要原因。后来我发现其实是整个中国的相关领域的研究生水平都差不多 ...

本月旧帖整理活动专题: T-A克隆技术大家可以在以下基础上进行整理或对具体问题进行讨论(1)如何筛选合适的宿主菌株◇ 所选的宿主菌株应对所用质粒的抗生素抗性基因敏感。◇ 如进行蓝/白斑筛选，宿主菌β-半乳糖苷酶的α-肽编码区应在染色体或附加体上缺失掉（lacZΔΜ15）。TOP10和DH5α都能用于蓝/白斑筛选。◇ 要表达重组蛋白，可使用带有可诱导的T7 RNA聚合酶基因的菌株，如BL21（DE3）。◇ 使用pGEM载体克隆大片段时（7-8 kb）， ...

丁香园专访：《生物实验室安全故事手记》主编孟博《生物实验室安全故事手记》主编孟博主编简介：孟博，华东师范大学脑功能基因组学研究所工作。丁香园荣誉版主Biowind。1978年12月出生，汉族，工程师，在读博士。教育经历：1996、9—2000、6：哈尔滨工业大学生命科学与工程专业，获学士学位。学位论文：以反义RNA技术研究鸡GDF-8基因功能2000、9—2002、6：哈尔滨工业大学生化与分子生物学专业，获硕士学位。学位论文 ...

提示：多数资料文件在几M到几十M左右，希望大家留的信箱地址能接受几十M大的附件。目的:增加本版面的服务透明度,更方便地为更多战友服务,也为了防止一些不必要的重复工作,特开辟索取资源帖.跟帖要求:1.格式 ID:资料名称(要写全)邮箱:跟帖日期:2.请正确写清邮箱地址,并注意邮箱的防垃圾功能，确保本邮箱不被拒收。（谨慎使用sina邮箱）如因地址不正确导致信件退回，当月内不再受理。顺延至下月重新索取;3.发帖完毕并得到资源后,不需 ...

做了快一年的分子克隆，犯了很多错误，经历了很多坎坷，也学到了很多东西。分子克隆过程中出现问题最多的大概就是连接了，大家抱怨的也最多，我也陷入在个步骤上很久。经过长时间的摸索我在连接这个问题上有一些体会，在这里跟大家分享一下我的经验，以供和我一样陷入困境及刚开始做克隆的同学参考。关于连接的提问多集中在连接的体系、DNA的用量、vector和insert的比例、连接酶等。但是我认为，连接不成功，问题并不一定出在连接这 ...

SAGE 技术在理论上来说可以检测到一个细胞内所有转录体的表达，而且可以给每一个转录体定量，不管它是低丰度还是高丰度。SAGE和基因芯片技术一样，具有高通量、平行性检测细胞内基因表达谱的特点。但SAGE可在未知任何基因或EST序列的情况下对靶细胞进行研究，这一点是基因芯片技术所不具备的。目前关于SAGE技术的文章在国外发表很多，但感觉国内搞SAGE研究的不是很多。本版特地在继10月份推出基因芯片技术大讨论之后， ...

请问大家，用地高辛标记和用放射性标记做实验，各有什么优缺点？实验过程和实验试剂有什么特殊的要求，拜**答案。。。。做过的请介绍介绍失败的和成功的经验，大家分享，谢谢附文章一篇:原位杂交实验原理与方法一、目的本实验的目的是学会原位杂交的使用方法。了解各种原位杂交的基本原理和优缺点。二、原理原位杂交组化（简称原位杂交，in situ hybridization histochemistry；ISHH）属于分子杂交的一种，是一种应用标 ...

最近要开展新的实验，对其中的Proteinase K 很感兴趣。对园子里的相关帖子进行里归纳整理，大家共同学习，进步。【求助】请问蛋白酶K买哪里的好？http://www.dxy.cn/bbs/thread/6533303请教：蛋白酶K配方http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive/post/862901_1.html在线求助： 蛋白酶K 的配置http://www.dxy.cn/bbs/actions/archive ...

1、哪种浓度的酒精消毒效果最好？－－－－70%酒精杀菌力最强，它能使蛋白质脱水和变性，在3～5分钟内杀死细菌。因此，它用于消毒和防腐，适用于皮肤和器械、塑料制品等的消毒。高浓度的酒精（95～100%）能引起菌体表层蛋白质凝固，形成保护层，使酒精分子不易透入，因此杀菌能力反而弱。2、试剂的等级有哪些？根据化学试剂的纯度，按杂质含量的多少可分为四级：一级试剂为优质纯试剂，通常用G·R表示；二级试剂为分析纯试剂，通常用A·R表示；三级 ...

这两年在美帝净做克隆实验了，以前读PHD时候还觉得自己分子克隆挺牛X的，来这边之后做了各种各样的构建才知道以前是坐井观天，刚才粗粗统计了一下，在美帝一年零八个月，我构建的质粒超过四百个，其中有很简单从PCR构建到拿WB结果的一共不到一周，也有巨难的花了四个月时间换了几次strategy才弄好激动得我半夜給老板发信的品种；有单片段酶切插入这种不用脑型的，也有九个片段逐一插入正反向还不同的。专家不敢说，但是熟能 ...

为了响应ftp资源讨论版不再处理站友的上传申请而由各专业讨论版的版主负责的举措，现做出以下说明：1.有关核酸基因技术的资源希望通过ftp共享，请在本版发新帖申请，一般有五人以上需要后即发给上传密码。是否加分鼓励，由本版的版主根据情况决定。对于不易界定专业的资源，以及部分比较难得的精品，仍然在ftp资源讨论版发帖申请。2.老赵一号ftp上实验技术专业组暂由lvzanlv协助版主管理。考虑到ftp的空间有限，所上传 ...

对于在本版出现的零回复求助帖，享有10天的置顶求助。站友回复这类帖子，加分从优！注意：被斑竹标为“★★★不规范发帖，请修改！！★★★★ ”的帖子，不在这个置顶处理之内。请站友们在原贴下回复，并在这个帖子下回帖给出链接，以便版主及时、区别加分。多谢合作！截至到2005-05-11【求助】合成c-myc、c-myb、pcna的as-odn求助 【求助】有关非变性聚丙烯凝胶回收ＤＮＡ！ 【求助】诸位战友,帮忙设计个"功能研究"的实验吧!谢谢 【求助】请问有谁 ...

基因工程所用的克隆载体常称之为分子克隆载体（molecular cloning vector），它是一类可供外源DNA插入并携带重组DNA分子进入适当宿主细胞的DNA分子。如果打一个十分浅显的比喻，分子克隆载体犹如航天技术中的运载火箭，外源DNA分子就如火箭上搭载的卫星，宿主细胞则如外部深邃的空间。分子克隆载体的主要功能就是将外源基因携带入宿主细胞，并在宿主细胞中进行DNA扩增和使外源基因得以高效表达。在这一点上又 ...

【CRISPR/Cas9系统的发现历史和应用-@华夏凯奇】-兼谈八卦。水平有限，不准确和班门弄斧之处，还望大家斧正。一、CRISPR系统的发现-从细菌的获得性免疫说起CRISPR系统实际是细菌的一种获得性免疫系统。细菌被phage侵染之后，可以获得phage的DNA片段整合进基因组形成记忆，当再次遭到入侵时，从对phage形成免疫。1） 早在1987年，日本人在大肠杆菌中发现有串联间隔重复序列。但一直不清楚功能。后来的研 ...

以Trizol说明书介绍的方法，将RNA和DNA的提取方法进行组合，同时提取RNA和DNA，RNA的纯度较高，可过1.9-2.0，而DNA的OD比值仅为1左右，请问各位有什么建议吗？以下是我的实验步骤，请各位指教。1.将培养板置于冰上，吸去培养液2.直接加入TRIZOL试剂(1ml/10cm2)，反复吹打3.将细胞裂解液转移到新的1.5ml Ep管中，室温放置5min4.加氯仿(0.2ml/1mlTrizol)，剧烈混匀15秒5 ...

实验很早之前做完了，总结一下银染。希望对后人有些帮助。银染技术很容易掌握，做好却需要注意一些小细节。希望我犯得这些小错误你能避开，节省宝贵的时间。本方法适当的修改了文献中的一些方法。文献在文章末已附上。——————————————华丽分割线——————————————————————————————————一、银染前准备1. 银染水质很重要，最好全部双蒸水或去离子水。2. 装胶的器皿清晰干净，最后双蒸水多冲几遍。3. 操作时戴手套，不然gel上会有大手印。4. 跑胶时我采用大梳子 ...

水是实验室内一个常常被忽视但至关重要的试剂。实验室用水有那些种类？能达到什么级别？不同实验对水的要求有那些？这些问题以前对我来说具有一些模糊的概念，前几天参加学校的纯水装置的招标，阅读有关的一些资料，初步了解了相关的知识，现在拿来和大家分享，绝大多数都是本人从外文资料翻译过来的，不当之处还望各位批评。这些资料也包括freecell战友在该版块的精华贴，在此也表示感谢！实验室常见的水的种类：1、蒸馏水（Distil ...

分子生物学研究尤其是病毒研究的过程中，通常要构建cDNA文库。分子克隆（第二版，中文版）介绍的方法一般不能得到全长的cDNA文库；undefined***55i5Fu7Q44wd5J17Rk5zL4xB7xD4w64u04ug8lL5927RIFyC4z66Ol6Dk8ka4uw6L87E74uD6Ol5$89hOFy89TU6Si4ww8d272vFyC6Si4ww7Rk59D8@O6oX6S951Q8@7cDNA文库）。下面这篇文章讲的是一种新的技术，因此将之介绍给大家，但愿对各位有所帮助。首先声明的是，本人在这里不是为某些公司做广告，请勿误会！！！文章来源：www.ebiotrade.com 科研社区 ...