DNA实验技术

碱法大量提取DNA往往需要很长的时间.Promega公司的Wiazrd大量DNA纯化系统既简单又快速，只需要离心和真空抽干，这个系统可以从500ml培养液中在3小时以内获得1mg以上的高质量的质粒DNA(200-20000bp)。该系统不需要酚和氯仿抽提，纯化后的DNA溶于水或TE缓冲液中，不含任何盐份，可以直接用于DNA序列分析和酶切反应，也可以用于在核酸酶抑制剂（如RNasin）存在的条件下进 ...

1、存放：超级感受态细胞必须从干冰运送包装箱取出直接放入–80℃冰箱的底部。一定不要用液氮来存感受态细胞。 1) 存放条件：超级感受态细胞对微小的温度改变也极度敏感，因此必须存放在–80℃冰箱的底部。即使是将细胞从一个冰箱转移到另一个冰箱也会导致转化效率的损失。采用BD Falcon 的14ml聚丙烯圆底试管：在转化实验中使用圆底14-ml BD Falcon聚丙烯试管（货 ...

核酸包括DNA、RNA两种分子，在细胞中都是以与蛋白质结合的状态存在。真核生物的染色体DNA为双链线性分子，原核生物的“染色体”、质粒及真核细胞器DNA为双链环状分子；有些嗜菌体DNA有时为单链环状分子，RNA分子在大多数生物体内均是单链线性分子，不同类型的RNA分子可以具有不同的结构特点，如真核mRNA分子多数在3’端带有poly(A)结构，至于病毒的DNA、 ...

Preparation of Transformation Competent DNA Dilute an overnight bacterial culture 1:20 in L broth. (For E. coli strain JA221 at A ) Using a serological pipet resuspend the bacterial pellet gently in ...

Analys of Genomic DNA by Southern Hybridization (Southern Blot) Outline: Localization of particular sequences within genomic DNA is usually accomplished by the transfer techniques described by South ...

This protocol is generalized and not to be considered optimal for all strains conditions and applications. Some aspects of this protocol may have to be modified significantly to suit your partic ...

Phenol (removes protein) 1.add equal volume of Phenol (= tris-saturated Phenol-Chloroform-Isoamyethanol) 2.vortex 3.spin 2 minutes at 12000 rpm 4℃ 4.transfer supernatant to a fresh tube (avoid aspi ...

11、将树脂/DNA 混合液抽干后加13ml柱子洗脱溶液至离心管中 对管底部的树脂/DNA 进行洗脱(柱子一边旋转一边加入洗脱液)，并加入柱子中。 12、真空抽干所加入的洗脱。 13、 再加12ml柱子洗脱液进柱子并抽干。 14、 加入5ml 80％乙醇漂洗柱中的树脂 柱子真空抽干后将柱子放入用户提供的离心管中2500rpm(1300g)离心5分钟。 15、 取出柱子，真空抽干5分钟再将柱 ...

（二）碱法 1、取1.5ml培养液倒入1.5ml eppendorf管中4℃下12000g离心30秒。 2、弃上清将管倒置于卫生纸上数分钟使液体流尽。 3、菌体沉淀重悬浮于100μl溶液Ⅰ中(需剧烈振荡)室温下放置5-10分钟。 4、加入新配制的溶液Ⅱ200μl 盖紧管口，快速温和颠倒eppendorf管数次以混匀内容物(千万不要振荡)冰浴5分钟。 5、加入150μl预冷 ...

生物芯片发展至今有很多名称和类型，通常将样品的制备，生化反应、结果的检测和分析这三步不同步骤集成为不同用途的生物芯片，据此分为不同的类型。例如用于样品制备的生物芯片，生化反应生物芯片及各种检测用生物芯片等。基因芯片技术发展的最终目标是将从样品制备、杂交反应到信号检测的整个生化检测分析过程集成到芯片上以获得微型全分析系统（micro total analytical system）或称所谓的&quo ...

生物芯片，简单地说就是在一块指甲大小（1cm3）的有多聚赖氨酸包被的硅片上或其它固相支持物（如玻璃片、硅片、聚丙烯膜、硝酸纤维素膜、尼龙膜等，但需经特殊处理。作原位合成的支持物在聚合反应前要先使其表面衍生出羟基或氨基（视所要固定的分子为核酸或寡肽而定）并与保护基建立共价连接；作点样用的支持物为使其表面带上正电荷以吸附带负电荷的探针分子，通常需包被以氨基硅烷或多聚赖氨酸等）将生物分子探针（寡核苷酸片 ...

1、新西兰兔 毛色：白色。 主要特征：红眼，体重4.0～5.5kg，性情温顺，繁殖力高，皮肤特别光滑，头宽圆而粗短，两耳较宽厚且直立。最大特点是早期生长快、产肉率高。 主要应用：①发热研究及热原试验；②免疫学研究；③心血管疾病及肺心病的研究；④生殖生理和胚胎学研究；⑤传染病的研究；⑥遗传性疾病和生理代谢失常的研究；⑦眼科学的研究；⑧皮肤反应试验。 2、Begle犬 主要特性：①喜与人为伴，有服从主 ...

For quantitating RNA levels from either polyA+ selected RNA or crude RNA preps. Solutions 10X Hybridization Buffer 0.4 M PIPES 12.1 g PIPES (Sigma #P6757) 4.0 M NaCl 23.4 g NaCl 10 mM EDTA 2.0 ml 500 mM EDTA pH to 6.7 and bring up to 100 ml with DEPC treated Q, autoclave 1X Hybridization Mixture 8 ml formamide 1 ml DEPC treated Q 1 ml 10X Hybridization Buffer 2X RNase Buffer 20 mM Tris 7.5 2 ml 1M Tris 7.5 10 mM EDTA 2 ml 500 mM EDTA 8.0 0.6 M NaCl 12 ml 5 M NaCl up to 100 ml DEPC treated Q, aut

Protocol for the cloning of pSHAG-MAGIC2 shRNAs Gregory HannonCold spring harbor lab pSHAG-MAGIC2.doc ...

最糟糕的心态-实验失败了，抱怨试剂不好。实验人员本来是应该拥有修正主义、机会主义、怀疑论等诸多“不完美的”意识，所以一定要用“完美的”自我批评意识来平衡。我为什么没有一双慧眼选择可靠的供应商？我为什么不做预实验检测所购试剂？ 最糟糕的知识-RNaseA的作用。RNaseA是内切酶，内切酶的作用结果是产生片段，而不是单个核苷酸，所以，RNaseA作用于 ...

S1 Nuclease Protection Assay End-label oligo (20-25 mer) 4 µl 5X T4 Kinase Buffer 5 µl ATP (7000 Ci/mmol) 10 µl water + oligo (200 ng) 1 µl T4 Kinase 1. 37 deg C for 1 hour. ...

Protocol for Isolation of Genomic DNA from Mammalian Cells 1.Trypsinize harvest and resuspend cells at 107 / ml in 10 mM Tris-HCl (pH 8.0) 10 mM EDTA. 2.Add SDS and Proteinase K to a final concentrat ...

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