DNA实验技术

Gene cloning or recombinant DNA technology is the joining of two or more segments of DNA to generate a single DNA molecule capable of autonomous replication within a given host (1). Ligase enzym ...

辐射性杂交(radiation hybrid RH) 制图技术是1975 年由Goss 和Harris 创立的一种体细胞杂交技术，适用于构建人类基因组长范围内的高分辨率连续物理图谱。成熟的辐射性杂交制图技术是由Cox VR 等人于1990 年建立的。 1 ．原理 利用高剂量的X 射线将候选染色体打断成若干片段，含有这种片段的细胞可与仓鼠细胞形成杂交克隆。在这种杂交中，人类染色体片段被插入到仓鼠染 ...

Sequence Analysis . Automated (Semi-Automated) Sequencers generate a four-color chromatograms on the results of the sequencing gel as well as a text file of sequence data. The sequencer can not verif ...

TSS方法制备感受态细菌（又称一步法） 一、 准备工作 1、 缓冲液1×TSS的配制： 事先配制1M的氯化镁――20.3g氯化镁(6分子水结晶)/定容于100ml去离子水后封装，不用灭菌。 取干净的100ml 量筒和100ml 烧杯，用量筒量取100ml去离子水，加入至烧杯中，取 1 g 蛋白胨，0.5g 酵母抽提物，0.5g 氯化钠，10 g PEG(MW= 3350) 5ml DM ...

一、目的 掌握从动物组织中DNA基本原理和方法，了解利用电泳技术分离、鉴定核酸的原理和方法。 二、原理 真核生物DNA主要以核蛋白形式存在于细胞核中，因此制备DNA必须先粉碎组织，裂解细胞膜和核膜，使核蛋白释放，在除去蛋白质、脂类、糖类和RNA等物质，得到纯化的DNA。在本实验的提取DNA反应体系中，SDS（十二烷基磺酸钠）破坏细胞膜和核膜，并使蛋白质变性，将核蛋白中的DNA与蛋白质分开，ED ...

作分子生物学实验，核酸纯化、酶切、克隆算是最基本的步骤了。因为要做定向克隆，通常要作双酶切。为了省时省事儿，我们常常想方设法把两个酶放在一起切。可是事情并非总那么称心如意——两个酶经常在一起闹别扭，不是反应温度不同啦，就是Buffer不同，有时候两个酶切位点连在一起，必须先切一个再切另一个，否则就切不动——因为有的酶除了识别位点之外还需要旁边留有几个 ...

Molecularpourous membrane tubing is used for desalting protein and DNA isolation / purification. It comes in several diameters and pore sizes (for molecular weight conversions for nucleic acids see ge ...

（1）诊断技术分类 1)根据目的基因是否被放大分类 可分为杂交法和扩增法。前者被检测的目的基因不被放大，如分支链DNA技术，但用杂交法可以进一步检测经过放大了的基因片段，如PCR产物杂交分析；后者包括PCR及连接酶链反应，Qβ复制酶系统等。 2)根据被测基因的核酸类型分类 ①在杂交法中，Southern印迹用于检测DNA；Northern印迹用于检测RNA；斑点印 ...

一、Chelex-100法提取生物检材中的DNA Chelex 100能有效除去非核酸有机物，主要用于提取全血或血痕、精液或精斑、混合斑、毛发、培养细胞等。但因生物样本来源不同其操作方法有所差异，以下分别介绍: （一）全血 (1)取3～10μl全血加到0.5ml离心管中，加人500μl纯水，剧烈振荡，室温下放置15分钟。 (2)13000rpm离心3分钟，去上清，收集沉淀。（必要 ...

Phenol-based Method for the Isolation of DNA Fragments from Low-Melting Temperature Agarose Reference: Favre D. 1992. Biotechniques vol. 13 1.Cut out slice containing DNA smallest size possible. 2.E ...

1 主要配制试剂 1）0.5M Na2EDTA PH8.0 2) Proeinase K(20 μg/μl) 3)6M GuSCN 10ml GuSCN 7.2g 加D·W至10ml 水浴60℃～65℃溶解 4） 二氧化硅悬浮液（Silica susponsion、用前混匀） Silica 12g加D、W至100l ↓ 充分混匀置于100ml量筒内 ...

Author: Laura-Lee Boodram Source: Laura-Lee Boodram Department of Life Sciences The University of the West Indies Abstract: The protocol is simple and fairly rapid. It does not require the use of orga ...

自杀性质粒载体完全可以自己构建，只要保证两点： 1.自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，也就是说载体上不能有能在宿主菌中复制的复制子； 2.要由筛选标记． 自杀性质粒载体不能在你的宿主菌里进行复制，否则会导致细菌染色体突变株的构建失败。但是在构建时，要注意以下方面： 1、在制备质粒载体和DNA插入片断时 2μg 5kb大小的线状DNA大约含有1.4poml/L5'末端磷酸。5&lsqu ...

Important : Extract the DNA within one week of receiving samples. Samples that have been processed should be frozen to prevent degradation. Freeze samples between use each day. 1.Add 600 ml of 50 mM ...

一、质粒 绝大多数的生物都是以DNA 的形式来储藏其遗传信息。遗传物质要能生生不息地传给后代的首要条件就是它至少要具有一个复制原(ori origin of replication，或译为复制起点)，使整个基因体得以复制。含有复制原的遗传物质称为replicon，我们姑且把它译为为复制体吧！原核性复制体分为原核染色体、质粒(plasmids)和噬菌体基因体(phage genome)等三类。其中质 ...

These procedures were originally devised in Richard Palmiter's lab for use with tail dots (DNA spotted onto a nitrocellulose filter and probed for a transgene; quicker than doing southerns) and subseq ...

macerate tissue in Eppendorf tube without butter at RT add 400 ml extraction buffer vortex for 4 sec leave sample at RT until other samples are ready (> 1 h) spin in microfuge for 1 min ...

DNA是遗传信息的载体，是最重要的生物信息分子，是分子生物学研究的主要对象，因此DNA的提取也应是分子生物学实验技术中的最重要、最基本的操作，如不能有效的完成DNA提取方面的工作，那就根本谈不上进行分子生物学方面的实验。在DNA提取过程中应做到1，根据不同研究需要，保证结构的相应完整性；2，尽量排除其它大分子成分的污染(蛋白质、多糖及RNA等)；3，保证提取样品中不含对酶有抑制作用的有机溶剂及高浓 ...

What is a crystaline precipitate that I get sometimes (not always) when I precipitate my genomic DNA preps and how can I get rid of it? theories are protein(that was not completely removed durin ...

Phenol-chloroform DNA extraction from sand flies 1. Crash Individual sand flies in 0.5 ml lysis buffer (50 mM NaCl 10 mM EDTA 50 mM Tris-HCl pH 8). 2. Incubate The sand fly homogena ...