DNA实验技术

For fragments from 200 bp to 10 kb the agarose purification is ideal. For smaller fragments (20 bp to 400 bp) the acrylamide purification is preferred. Solutions Crush and Soak Solution 500 mM NH4 OAc ...

PCR扩增反应完成之后，必须通过严格的鉴定，才能确定是否真正得到了准确可靠的预期特定扩增产物。凝胶电泳是检测PCR产物常用和最简便的方法，能判断产物的大小，有助于产物的鉴定。凝胶电泳常用的有琼脂糖凝胶电泳和聚丙烯酰胺凝胶电泳，前者主要用于DNA片段大于100bp者，后者主要用来检测小片段DNA。 1．琼脂糖凝胶电泳 这是实验室最常用的方法，简便易行，只需少量DNA即可进行实验。其原理是不同大小 ...

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA 送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒DNA 的纯度、靶细胞的生长状态等，下面重点介绍向几种常用的转染技术： 被用于作靶基因转染的细胞，其生长状态如何， ...

本方法的核心部分是医科院基础所的生化脂蛋白组的吴刚老师所创，我在其基础上进行了一些改动，主要是DNA回收上采取了更简单的方法。（本方法最适用于双酶切制作片断并进行克隆的情况。对于分步酶切制作片断，也可以使用本方法，但需要加倍起始酶切DNA的量。） 一、片断平移的克隆（也适用于多片断连接） 简介：将用作载体的质粒A（制作大片断）酶切3μl ，要切出小片断的质粒B酶切7μl；琼脂糖回收胶电 ...

1. Grind 20-50 frozen flies with a mortar and pestle in N2(l) and suspend in 2 ml Lysis Buffer. 2.Add Proteinase K to 100 mg/ml; incubate 1-2h @ 37℃ with occassional swirling. 3. Phenol extract GENTL ...

Steve Hahn ...

1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels) 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel in (0.5 M NaOH 1.5 M NaCl) for 20' (small) to 30' (large). 3. Neutralization: Wash in ...

原理： 转化(Transformation )：将外源DNA 分子引入受体细菌，使之获得新的遗传性状。 受体细菌一般是限制修饰系统缺陷的变异株，不含限制性内切酶和甲基化酶的突变体(R-M-)，可以容忍外源DNA 分子进入体内并稳定地遗传给后代。受体细胞经过一些特殊方法，如电击或CaCl2 、RbCl/KCl等化学试剂的处理后细胞膜的通透性增高，成为感受态细胞(Compenent cells)， ...

H. Simmler and H. Singpiel Acconovis GmbH Lindenhofstr. 42-44 68163 Mannheim Germany eMail: simmler@acconovis.com R. M¨anner Universit¨at Mannheim B6 23-29 68131 Mannheim Germany maenner@ti.un ...

Materials: Whatman 3 mm Blotting Paper nitrocellulose (Schleicher & Schuell Amersham) or nylon membrane filter (Amersham). Paper towels (preferably C-fold "cheap-o" variety) Pyrex or Tup ...

一、目的与原理 转化是指以质粒DNA或以它为载体构建的重组子导入细菌的过程。转化技术在基因工程领域中占有极重要的地位。目前用得较多的转化技术为将人工构建的重组质粒到如受体细胞，使重组质粒在受体细胞中稳定地复制和表达。 二、材料和方法 1.材料：大肠杆菌 2.仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3.试剂 LB培养基; 0.1M mM CaCl2 ; 0.1M MgCl2 ; TF ...

1) Use Pharmacia #27-4564-01. With clean flamed scissors and forceps weigh 0.25 g/50 ml conical and add 50 ml/conical of 0.02 M Tris pH 7.6. Allow to dissolve over several days at 4℃. 2) Vortex. Draw ...

1. Separate DNA fragments in an agarose gel cast with 0.5 mg/mL Ethidium bromide. Locate bands with a hand-held long-wave UV lamp.2. Slice the gel with a razor blade above and below the bands of inter ...

To efficiently determine the chromosomal location of phenotypic mutants we designed a genome-wide mapping strategy that can be used in any crop for which a dense AFLP (Amplified Fragment Length Polymo ...

【摘 要 】FISH技术是80年代开始发展起来的一种新的定位技术。在人类基因组研究中得到了广泛的应用。通过中期染色体的FISH可以进行SCP，Cosmid和YAC的染色体定位，嵌合克隆的鉴别；通过间期核的FISH可以在50kb的分辨率下进行基因作图；最新的研究进展已可以进行伸展的染色质丝（chromatin fibre）的FISH，直接测量基因的长度，从而达到高精度基因作图的目的，总之，随着FIS ...

载体及目的DNA 片断经酶切后，如果无多余的片断（如载体单切）可以直接酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收直接连接用。但多数还有多余片断（如载体双酶切后有插入片断但要回收空载体，多个目的DNA片断选择其一克隆），必须电泳分离后回收目的片断。回收的方法既有传统的方法，这些方法基于降低凝胶的熔点以释放DNA，然后通过酚/氯仿抽提后乙醇沉淀回收，也有公司生产的商品化的试剂盒可用，这些试剂盒多采用凝胶裂解液（如含有 ...

在体外将DNA分子片段与载体DNA片段连接，转入细胞获得大量拷贝的过程中DNA分子克隆(或基因克隆)。其基本步骤包括：制备目的基因→将目的基因与载体用限制性内切酶切割和连接，制成DNA重组→导入宿主细胞→筛选、鉴定→扩增和表达。载体（vecors）在细胞内自我复制，并带动重组的分子片段共同增殖，从而产生大量的DNA分子片段。主要目的是获得某一基因或NDA片段 ...

一、 病毒标本中提取DNA(支原体、腺病毒)处理方法 （1）将擦拭过的咽拭纸放入1.5ml装有1ml生理盐水的eppendorf管中。 （2）以10000r/min离心5分钟，去上清液。 （3）沉淀物加入30 ml TE液混匀后煮沸10分钟，4℃保存备用。 二、 从细菌中提取DNA 1．NG（淋球菌）DNA的提取 标本可取自尿道、生殖道或结膜分泌物。 （1）取男性尿道口或女性宫颈处分 ...

Recovering DNA from agarose gels Paul N. Hengen Ph.D. (July 14 1999) Introduction Methods and reagents is a unique monthly column that highlights current discussions in the newsgroup bionet.molbio.met ...

一、 目的 熟练掌握抽提细菌DNA的一般方法 二、原理 要进行重组DNA 实验，就离不开外源基因的纯化，而外源基因主要来源之一就要直接从生物的染色体DNA上制备，所以制备高质量的染色体DNA样品经常为基因工程实验所需要，抽提细菌染色体DNA的方法目前已有许多种，这里所介绍的两种方法：一适用于枯杆菌染色体的抽提；另一种方法则适用于大肠杆菌染色体的制备。 基因工程实验所需要的基因组DNA 通常要求分子 ...