DNA实验技术

Hi everyone i'm looking for a good southern blot protocol with all the secrets of this technique. I never did it but I know is not too difficult. I'd like a protocol that show me the "way to do& ...

Q: 怎样对合成DNA制品进行定量? A: DNA的量与260 nm处的吸光度值（OD值）成正比，因此使用紫外分光光度计定量是最科学的。1个OD值的合成DNA的重量约为33 mg。 Q: 怎样理解测定的OD值? A: 进行OD值测定时，分光光度计上显示的数值为每毫升溶液中的OD值。当测定200 ml溶液中的OD值为1.5时，溶液整体的OD量应该为多少？此时的OD值 = 1.5 OD/ml &ti ...

Hi I have a 9kb fragment already cloned into bluescript and I am trying to insert an extra 3.5kb. I've been trying for some time now with no success - when I do get colonies very few have any of the n ...

原理： 此技术建立于PCR基础之上，使用一系列具有10个左右碱基的单链随机引物，对基因组的DNA全部进行PCR扩增，以检测多态性。由于整个基因组存在众多反向重复序列，因此须对每一随机引物单独进行PCR。 单一引物与反向重复序列结合。 使重复序列之间的区域得以扩增。 引物结合位点DNA序列的改变以及两扩增位点之间DNA碱基的缺失、插入或置换均可导致扩增片段数目和长度的差异，经聚丙烯酰胺或琼脂糖凝胶 ...

Amberg Lab Upstate Medical University http://www.upstate.edu/biochem/amberg/protocols/transformation.html 1.Grow cells to 1X10E8 or OD600 of 1.2-1.3. 2.Spin cells at 5000rpm for 5 min and wash pelle ...

一、目的与原理 当细菌处于容易吸收外源DNA的状态时，即为感受态，而用理化手段使细菌处于感受态的操作为致敏过程。感受态细胞制备是重组基因能否实现转化的一个重要的技术环节。本试验是通过钙离子来诱导使之成为感受态细胞。 二、材料和方法 1． 材料：大肠杆菌 2． 仪器： 离心机，恒温摇床，恒温水浴，超净工作台，冰柜 3． 试剂 LB培养基，0.1M MgCl2，3mM氯化六氮合高钴 TFB ...

一、目的: 了解质粒抽提常用的方法和原理；掌握试剂盒制备质粒DNA 的法。 二、原理： （一）质粒DNA 制备三个步骤： 1、细菌培养与质粒扩增 2、菌体收集和溶菌 3、质粒DNA分离 （二）方法介绍： 1、碱变性抽提法（SDS法）:主要是利用染色体DNA和质粒DNA碱性环境中变性和复性的差异来分离出质粒DNA。染色体DNA 分子量比较大，在碱性环境中（高pH）变性，双链解拆开，抽提时由于机械剪切 ...

实验步骤： 1、将适合菌株（如XL1-Blue DH5α）置于LB或其他营养丰富的培养基上，在37℃下过夜培养 。 2、高温灭菌大的离心瓶（250-500ml）。准备几瓶灭菌水（总量约1.5升），保存于冷冻室中以备重悬浮细胞用 。 3、转移0.2-1ml过夜培养物至装有500ml LB（或其他营养丰富的培养基）的1-2升挡板摇瓶中 。 4、37℃下剧烈振荡培养2-6小时。 5、定时监 ...

Abstract: It is very difficult to isolate Rhizobium DNA due to the gum production by the organism. Hence we have designed a protocol for efficient isolation of DNA from the organism for further gene a ...

实验目的 要获得表达的基因AKP，必须构建重组子。 我们通过以下的方法构建重组DNA，转入受体菌，就可以表达出目的基因。 之所以重组子要进入细胞，是因为大肠杆菌中有修饰的机制，可以在转入表达载体时不被降解，高效表达。 实验原理及过程 ...

1.PCR技术 PolymeraseChainReaction聚合酶链反应 它是一种模拟天然DNA复制过程，在有DNA模板、DNA聚合酶（Taq酶）、RNA引物和四种dNTP的情况下，通过高温变性（90℃－95℃，1－2min）低温退火（25℃－37℃，1－2min）中温延伸（60℃－75℃，90sec-5min）这样反复循环的过程中，在体外扩增特异性DNA片段的分子生物学技术。 1）、PCR反应 ...

This is a four day procedure so it's best to start on Monday or Tuesday. CASE SELECTION: H&E stained thin sections are first reviewed by a pathologist and areas of interest are outlined. Tissue bl ...

Chapter 4 replication DNA replication DNA damage and repair Reverse transcription RNA replication DNA复制的基本特点 半保留复制(self-conservative replication) 复制子(replicon) 半保留复制 1958年Meselson 和Stahl首次用实验证实了DNA的半保 ...

Inoculate 1 ml of L-broth or other rich media with cells of the strain from which genomic DNA is to be isolated. Grow this culture at 37℃ overnight on a roller. Transfer this overnight culture to a 1. ...

DNA分子的体外连接就是在一定条件下， 由DNA连接酶催化两个双链DNA片段组邻的５’端磷酸与３’端羟基之间形成磷酸酸脂键的生物化学过程， DNA分子的连接是在酶切反应获得同种酶互补序列基础上进行的。 带有相同末端(平端或粘端)的外源DNA必须克隆到具有匹配末端的线性质粒载体中，但是在连接反应时，外源DNA和质粒都可能发生环化，也有可能形成串联寡聚物。因此，必须仔细调整连接 ...

常态的细胞不能摄入外部溶液中的DNA，所以要转化质粒DNA进入大肠杆菌必须首先制备感受态的大肠杆菌细胞。受体细胞经过一些特殊方法（如：CaCl，RuCl等化学试剂法）的处理后，细胞膜的通透性发生变化，成为能容许多有外源DNA的载体分子通过的感受态细胞(competent cell) 。 转化，是将异源DNA分子引入一细胞株系，使受体细胞获得新的遗传性状的一种手段，是基因工程等研究领域 ...

Abstract: The “Freeze squeeze” method is a cost effective and technically simple procedure to isolate and prepare PCR products for DNA sequencing. Reagents •70% ethanol •3 M so ...

报告基因(reporter gene)是一种编码可被检测的蛋白质或酶的基因，是一个其表达产物非常容易被鉴定的基因。把它的编码序列和基因表达调节序列相融合形成嵌合基因，或与其它目的基因相融合，在调控序列控制下进行表达，从而利用它的表达产物来标定目的基因的表达调控，筛选得到转化体。 作为报告基因，在遗传选择和筛选检测方面必须具有以下几个条件：(1)已被和全序列已测定；(2)表达产物在受体细胞中不存在， ...

分子诊断技术在检验医学的基础和临床研究中显示出强大的优势，例如，在乙型肝炎的诊断和治疗中，应用DNA定量技术为乙型肝炎的治疗和预后监测提供了重要依据，但近近不无症状乙型肝炎表面抗原携带者及乙型肝炎表面抗阴性者的人群中检出了前C终止密码子变异（G1896A）。研究表明，突变将导致乙型肝炎病毒继续复制，因此这一信息对于临床诊疗十分重要。又如庆大霉素等氨基糖苷类抗生素的毒副作用之一是诱发耳聋，且已证明线 ...

1.Take the 384 well viper plate from the thermocycler. Remove the Silicone Sealing Mat (Axygen Scientific: AM-384-PCR-RD) and place face down on a paper towel and pat to absorb any liquid that may be ...