DNA实验技术

基因的克隆就是利用体外重组技术，将特定的基因和其它DNA顺序插入到载体分子中。基因克隆的主要目标是识别、分离特异基因并获得基因的完整的全序列，确定染色体定位，阐明基因的生化功能，明确其对特定性状的遗传控制关系。通过几十年的努力由于植物发育，生理生化，分子遗传等学科的迅速发展，使人们掌握了大量有关植物优良性状基因的生物学和遗传学知识，再运用先进的酶学和生物学技术已经克隆出了与植物抗病、抗虫、抗除草剂 ...

when I extracted DNA from chicken red blood cellI met a very strange question.After the phenol and chloroform treation.I collected the upper layers (it is not liquid but like some transparent s ...

The Minion Lab College of Veterinary Medicine at Iowa State University http://mycoplasmas.vm.iastate.edu/lab_site/methods/DNA /restrdig.html ...

Retroelements and their derivatives are a ubiquitous and abundant component of plant genomes. From the 1990s PCR based techniques have been developed to isolate the elements from genomic DNA of differ ...

DNA连接酶是1967年在三个实验室同时发现的。它是一种封闭DNA链上缺口酶借助ATP或NAD水解提供的能量催化DNA链的5'-PO4与另一DNA链的3'-OH生成磷酸二酯键。但这两条链必须是与同一条互补链配对结合的(T4DNA连接酶除外)而且必须是两条紧邻DNA链才能被DNA连接酶催化成磷酸二酯键。 常用的DNA连接酶有两种:来自大肠杆菌的DNA连接酶和来自噬菌体的T4DNA连接 ...

Materials: • 0.8 % agarose gel in 1x TAE • Digested DNA • Glass Milk • NaI solution • New Wash Procedure: 1)Run digested DNA out on agarose gel slowly (70 V on BioRad gel) 2)U ...

1.Grow 5 ( large scale-15ml culture). Harvest in single eppendorf tube (or 15 ml disposable tube). 2.Resuspend pellet with 300μl STET buffer (900μl). After resuspending add 30μl RNase/lysozy ...

Hancock Laboratory Methods. Department of Microbiology and Immunology University of British Columbia British Columbia Canada http://www.cmdr.ubc.ca/bobh/showmethod.php?methodid=12 REFERENCE: GATA 19 ...

一．原理 ⑴ 5’-RACE法 ① 以目的mRNA 为模板，使用5’末端P 标记的RT 引物进行反转录反应，合成1ststrand cDNA。 ② 使用RNase H 分解 Hybrid DNA-RNA中的RNA链。 ③ 使用T4 RNA Ligase 使单链cDNA进行环化或形成首尾连接物。 ④ 进行PCR扩增。 图 4－2 5’-RACE 法原理 ⑵ 引物 ...

目的基因与载体的重组（重组体的构建）程序如下： （1）质粒DNA 的分离纯化。一般含有单个目的基因的DNA 片段，即使进入了宿主细胞也不能进行增殖。通常它需要同适当的能自我复制的DNA 分子（例如质粒、噬菌体DNA 等）结合后，才能在通过转化或其他途径导入宿主细胞，像正常质粒或病毒一样增殖和易于检测。分离质粒载体DNA 有许多方法，但其共同步骤是先用溶菌酶处理含有质粒载体的宿主菌培养物，以除去其细 ...

Amberg Lab Upstate Medical University http://www.upstate.edu/biochem/amberg/protocols/seq_temp.html Notes on DNA : The cleaner the better.If mini DNA use phenol extracted and use the entire mini pre ...

GEL PURIFICATION OF OLIGONUCLEOTIDES (Adapted from the method of Mark Fortini) 1. Quantitate crude oligo solution via UV spectrophotometry. Assume 1.0 A260 unit is equal to 33μl/ml. Dry down 100&mu ...

差减杂交法是目前广泛应用于差异性基因分离和鉴定的方法之一。简单地讲，差减杂交法是基于不同样品间特定核酸序列 ( 基因组 DNA 或 mRNA) 在数量 ( 等位基因数目或拷贝数或表达量 ) 上的差异，通过分子间的同源性杂交将存在数量差异性的序列分离出来。从研究对象和使用的基本材料来看，大致可以分为两类，即基因组差减杂交法和 mRNA 或 cDNA 差减杂交法。 1 ．原理 就是将不同来源的基因组D ...

(adapted from Bruce A. Roe Department of Chemistry and Biochemistry The University of Oklahoma Norman Oklahoma 73019 broe@ou.edu) Restriction enzyme digestions are performed by incubating double-stran ...

I'm looking for a methode to demethyle DNA in vivo during more than 5 days . All I've read about 5-aza-CdT is for maximum 5 days. Why ? Is there another drug and if yes how does it work ? thanks Elea ...

随机扩增多态DNA (Random Amplified Polymorphic DNA ，简称RAPD)是J.Williams和J.Welsh两个研究小组于1990年同时提出的一种随机引物扩增，寻找多态DNA 片段的遗传标记技术，它是建立在PCR技术基础上，以随机的寡聚脱氧核苷酸作为PCR反应引物，对基因DNA 进行扩增而显示DNA 图谱和对物种进行亲缘关系、系统发育分子水平的鉴别，以及分子生物学 ...

试验准备： 1、LB液体培养基(Luria-Bertani) ：称取蛋白胨(Tryptone)10 g，酵母提取物(Yeast extract) 5 g，NaCl 10 g，溶于800ml去离子水中，用NaOH调pH至7.5 加去离子水至总体积1升高压下蒸气灭菌20分钟。 2、LB固体培养基：液体培养基中每升加12g琼脂粉高压灭菌。 3、氨苄青霉素(Ampicillin Amp)母液：配成 50 ...

双元载体的农杆菌转化 1.1农杆菌感受态细胞的制备 1.1.1. 取-70℃保存的EHA105于含50μg/ml链霉素平板划线，28℃培养。 1.1.2. 挑取单菌落接种于5ml YM液体培养基中，220rpm 28℃振荡培养12-16 hr。 1.1.3. 取2ml菌液转接于100ml YM液体培养基中，28℃220rpm振荡培养至OD600=0.5。 1.1.4. 转入无菌离心管，500 ...

一、实验目的 学习和掌握DNA的微量提取法。 二、实验原理 小麦黄化苗经液氮研磨，可使细胞壁破裂，加入去污剂（如SDS），可使核蛋白体解析，然后使蛋白和多糖杂质沉淀，DNA进入水相，再用酚、氯仿抽提纯化。本实验采用SDS法，其主要作用是破膜。SDS属阴离子去污剂，要溶解膜蛋白与脂肪，也可解聚核蛋白。SDS在溶液中带负电荷，能与带正电荷的蛋白质侧链结合成复合物，当加入钾盐时，能与SDS－蛋白质生 ...

Hi This is my first post and I am desparately looking for some help recovering DNA from CsCl preps. I have recently run into some problems precipitating DNA using sodium acetate (3M 1:30 dilution) and ...