DNA实验技术

DNA sequencing is the determination of the precise sequence of nucleotides in a sample of DNA. The most popular method for doing this is called the dideoxy method. The equipment and supplies:·S ...

Non-radioactive Probes I. Via random hexamers 1. Solutions: 10X hexa nt miundefined: 500 mM Tris-Cl pH 7.2 100 mM MgCl2 1 mM dithioerythritol (DTE) 2 mg/ml BSA 62.5 A260 units/ml (1.56 mg/ml) random hexan ...

Steven FinkbeinerDepartments of Neurology and PhysiologyUCSF http://gweb1.ucsf.edu/labs/finkbeiner/Protocol/protocol_list/cloning.shtml DIGEST: 1.Digest 10 - 20μg DNA to isolate either the desired ...

载体与外源DNA分子体外重组时，如何选择优化连接条件以达到最高的重组率。因此有必要根据影响连接效率的因素综合考虑连接条件。影响连接效率的因素很多，如反应温度、插入片段和载体之间的摩尔比、DNA末端性质、反应时间、ATP浓度等。 1. 反应温度是比较重要的影响因素。因为连接酶的最适反应温度为37℃，但在此温度下仅含4-6bp的退火粘末端之间的氢键结合不稳定（Tm≤15℃），不足以抵抗拒热运动的 ...

Cepko/Tabin Lab Harvard University http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/E1.html Cepko/Tabin Lab Harvard University http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/E1.html Solutions 10X A ...

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Abstract: The protocol is simple and fairly rapid.It does not require the use of organic solvents but rather utilizes salt extraction to precipitate contaminating proteins.High quality DNA is obtained ...

What are the differences between phasmidcosmidsphagesand plasmids. -- -------------------------------------------------------------------------------- Hope this brief explanation helps. Phasmid are hy ...

Overview Procedure 1. Preheat the CTAB Isolation Buffer at 60℃. 2. Grind 2 g of fresh leaf tissue to a powder in Liquid Nitrogen in a chilled mortar and pestle. 3. Scrape the powder into a chilled 50 ...

重组DNA转化受体细胞后，须在不同水平上进行筛选，以区别转化子与非转化子、重组子与非重组子以及鉴定所需的特异性重组子。在转化过程中，并非每个受体细胞都被转化；即使获得转化细胞，也并非都含有目的基因，所以需采用有效方法进行筛选。筛选的方法包括根据遗传表型筛选、限制性内切酶分析筛选、核酸探针筛选、PCR筛选等。本实验采用遗传表型筛选中的抗生素平板筛选或α互补筛选的方法。 一、抗生素平板筛 ...

体外连接的DNA重组分子导入合适的受体细胞才能大量增殖。为了提高受体菌摄取外源DNA的能力，提高转化效率以获得更多的转化子，人们摸索出了不同的方法处理细菌，使其处于感受态。目前主要采用电转化法和CaCl2法将外源DNA导入受体细胞中，并需要相应地制备电转化感受态细胞和CaCl2感受态细胞。 实验目的：学习感受态细胞的制备过程 实验材料：大肠杆菌菌株DH5a或DH10B 实验原理：电转化法是利用瞬间 ...

1.溶液I―溶菌液: 溶菌酶:它是糖苷水解酶能水解菌体细胞壁的主要化学成分肽聚糖中的β-14糖苷键因而具有溶菌的作用。当溶液中pH小于8时溶菌酶作用受到抑制。 葡萄糖:增加溶液的粘度维持渗透压防止DNA 受机械剪切力作用而降解。 EDTA:(1)螯合Mg2+、Ca2+等金属离子抑制脱氧核糖核酸酶对DNA 的降解作用(DNase作用时需要一定的金属离子作辅基);(2)EDTA的存在有利于溶 ...

简单序列长度多态性（simple sequence length polymorphism，SSLP）是据串联重复排列微卫星基序两侧的单一序列设计引物，对微卫星序列（microsatellite DNA 或simple sequence repeats，SSR）进行扩增，由微卫星基序重复数目的变异而产生多态性。由于中某一特定的微卫星的侧翼序列通常都是保守性较强的单一序列，因而可以将微卫星侧翼的DN ...

在非理想的条件下，内切酶切割与识别位点相似但不完全相同的序列，这一现象称星号活性。有人提出，这种"星号"活性可能是内切酶的一种普遍特性（1），如果提供给相应反应条件，所有内切酶都会出现非特异性切割。NEB已证实下列酶存在星号活性：Apo I（2）、Ase I（2）、BamH I（3）、BssH II（2）、EcoR I（4）、EcoR V（5）、Hind III（1）、Hinf ...

Cepko/Tabin Lab Harvard University This protocol works well from a 5 ml starting culture or a 1 ml starting culture (adjust volume accordingly). http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/S2.ht ...

Hi everybo ...

Mirmira Laboratory at the University of VirginiaThere are multiple variations to this protocol but we find that this one works well in all cases we tested. http://faculty.virginia.edu/mirmira/resource ...

实验目的 为了获得大量的质粒作为克隆载体，我们需要将购买来的质粒通过转化的方法导入细菌的细胞内。 制备出感受态的细胞，我们就可以方便的将需克隆的质粒导入其中，使其繁殖，就能获得大量质粒。 本次实验的目的就是增加质粒的数量。 同时，我们能掌握大肠杆菌感受态细胞的制备及转化的基本原理和实验技术方法。 实验原理及过程 ...

Plasmid DNA isolated by this procedure can be used routinely for electrophoretic analysis restriction endonuclease digestion and transformation of E. Coli. DNA sequencing PCR and most other molecular ...

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