DNA实验技术

Use from 0.01 - 0.1 gram plant material. Grind the plant material with liq.N2 in a mortar.We normally use some alumina to crush hard tissue. Transfer the ground tissue to a eppendorf tube. Add 1 ml ex ...

标记育种是利用与目标性状基因紧密连锁的遗传标记，对目标性状进行跟踪选择的一项育种技术。与育种有关的遗传标记主要有四种类型: 形态标记（morphological marker）、细胞标记（cytological markers）、生化标记（Biochemical marker）和分子标记（molecular marker）。早在1923年，Sax等就提出利用微效基因与主基因的紧密连锁，对微效基因进 ...

i want to know how can i extract DNA from water microbe? -tanklm- -------------------------------------------------------------------------------- Standard DNA extraction proceedures should work fine ...

该法 可 ...

实验步骤： 1、待回收的DNA段经电泳分离后，从琼脂糖凝胶上切下所需DNA段，放在1.5ml EP管中； 2、加入3 倍（请准确估量凝胶的体积）体积的溶胶液（以100μl 体积胶加入300μl 溶胶液为一次标准反应），室温下放置5分钟或50℃ 保温3分钟，其间轻摇EP管几次使胶完全融化； 3、加入10μl玻璃奶（玻璃奶使用前请充分摇匀），颠倒混匀，冰浴下放置10分钟。每隔2~3分 ...

TRANSFORMATION (ONE-STEP PEG METHOD) 1.Dilute 1:100 a fresh O/N culture of bacteria into prewarmed LB broth and incubate cells with shaking (225 rpm)to an OD600 of 0.3-0.4. 2.Add an equal volume of ic ...

I have read some books but cannot find the answer.I think NaAc may increase the ionic strength to stabilize DNA duplexes.Is it right? Thanks. -freshman- ----------------------------------------------- ...

Isolation of DNA from Agarose Gels (Paper Slurry Method) This procedure isolates DNA from agarose gels by filtration through a filter-paper column.The column is made in a 500 µL tube from a slur ...

I am trying to digest mouse genomic DNA for a southern blot. When digested with either HIndIII or NdeI I get a nice smear as expected. But when I digest with either speI or BglII (neither one of which ...

该法是R.Treisman尚未发表的方法同时也是Brinboim和Doly(1979)及Ish-Horowicz和Burke(1981)所用方法的改进。该方法对于目前使用的所有大肠菌菌株都卓有成效并可与随后的纯化步骤如聚乙二醇沉淀或氯化铯-溴化乙锭梯度平衡离心等一并联合使用。注:括号中给出的体积可适用于未经氯霉素处理的培养。 试验准备: 1、溶液I:50mmol/L葡萄糖 25mmol/L Tr ...

1.Add an equal volume (equal to sample volume)of P/C to sample. 2.Mix (shakedon't vortex). 3.Take aqueous (upper)layer.(If dirty samplerepeat Ph/Chl step until interface is fairly clean). 4.Add equal ...

克隆成功与否除与连接方式以及载体选择有关外载体的处理也是一个重要环节。为了提高连接效率处理载体时应注意以下几点: (1)应加入常用量5~10倍的内切酶水解载体以保证载体被完全酶切; (2)如用双酶切割载体则必须电泳回收载体片段除去双酶切所产生的小DNA片段;�(3)如粘端连接单酶切处理过的载体必须用 碱性磷酸酶 (如牛小肠碱性磷酸酶CIP)处理防止载体自身环化。 CIP 可以水解掉DNA5末端的 ...

1、低温下长时间的连接效率比室温下短时间连接的好，平端连接需要过夜反应。 2、在体系中加一点切载体的酶，只要连接后原来的酶切位点消失。这样可避免载体自连，应该可以大大提高平端连接的效率。 足够多的载体和插入片段是最重要的 。要看片段具体情况而言，有时载体和片段浓度过高，容易产生线性化产物，不利于环化的。插入的DNA的摩尔数是载体摩尔数的5-10倍，这个很关键。载体通常50ng就够了，若载体在10k ...

Preparation of linear polyacrylamide used as carrier in ethanol precipitation of nucleic acids Linear polyacrylamide can be used as an efficient neutral carrier for precipitating nucleic acids with et ...

1.Crash Individual sand flies in 0.5 ml lysis buffer (50 mM NaCl 10 mM EDTA50 mM Tris-HCl pH 8).2.Incubate The sand fly homogenates with 100 ng/ml Rnase at 37 ℃ for 30 minutes. 3.Incubate The cell lys ...

利用D NA 连接酶把载体 DNA 和要克隆的目的 DNA 片段连接在一起，成为一个完整的重组分子，这就是分子克隆中常说的连接反应。当载体 DNA 和外源 DNA 末端都是由一种产生粘性末端的内切酶切割产生的话（同尾酶也可以），或者两者末端被接上一段互补的多聚体的尾巴，那么经退火后可形成新的重组分子。连接后产生的重组分子中仍然保留着外源 DNA 两端的限制性内切酶切点 ，从而使我们能方便地从重组 ...

聚合酶链反应（polymerase chain reaction，PCR）是体外酶促合成特异 DNA 片段的一种技术。利用PCR技术可在数小时之内大量扩增目的基因或DNA 片段，从而免除基因重组和分子等一系列繁琐操作。由于这种方法操作简单、实用性强、灵敏度高并可自动化，因而在分子生物学、基因工程研究以及对遗传病、传染病和恶性肿瘤等基因诊断和研究中得到广泛应用。 PCR进行的基本条件是： （1）以 ...

Cepko/Tabin Lab Harvard University http://axon.med.harvard.edu/~cepko/protocol/mike/R1.html Protocol R.1 Random Prime Labeling of DNA Solutions Buffer A 1.25 M Tris 8.0 625 ml 2M Tris 8.0 2 125 ml 1M ...

hi thereI have been trying to clone 3.4 kb insert into pcDNA3.1- for months without any success.The insert is subcloned in TOPO from where I cut it out by KpnI and NotI and purify it by gelelectrophor ...

1.O/N (5ml E.coli in LB-->1ml into 200ml LB/37℃ 2.Grow 2-3H to A660 ~0.3-0.4 3.Chill cells 10'/ice Spin down 10'5K4℃ 4.Wash 1X 200ml 10% glycerol (sterile)40℃; Spin down 10'5K4℃ 5.Wash 1X 40 ml 10% ...