DNA实验技术

Silica Clean-up of DNA --------------------------------------------------------------------------------Materials: Silica Suspension: add 2g of silica to 15ml of H2O wash 3x by centifugation at 2000 x ...

I wa ...

1. Grow 10-mL yeast cultures overnight to saturation in appropriate media at 30℃. 2. Spin cells down for 5min at 1500rpm (Beckmann) and resuspend the cells in 0.5 mL sterile distilled water. 3. Transf ...

磷酸钙-DNA 共沉淀法 核酸以磷酸钙-DNA 共沉淀物的形式出现时，可使DNA 附在细胞表面，利于细胞吞入摄取，或通过细胞膜脂相收缩时裂开的空隙进入细胞内，进入细胞的DNA 仅有1%～5%可以进入细胞核中，其中仅有不到1%的DNA 可以与细胞DNA 整合，在细胞中进行稳定表达，基因转导的频率大约为10-4，这项技术能用于任何DNA 导入哺乳类动物进行暂时性表达或长期转化的研究。此方法对于贴壁细 ...

Protocol f ...

实验目的 将复杂的细胞分子混合物加入有机溶媒萃取以除去蛋白质及其它成分，就可以纯化DNA。一般常用酚及氯仿(phenol/chloroform)可使蛋白质变性(denaturaion)的特性来进行萃取的步骤，DNA和RNA不溶于有机溶媒中，而溶于水层。另外，分子选殖(molecular cloning)常利用洋菜胶(agarose)来分离不同大小的DNA片段或用以纯化DNA。 核酸定量可利用核酸会 ...

DNA PrepPrepare DNA via your favorite method. You may find a protocol underMini Yeast Genomic Prep.Restriction Digest1.Digest DNA with appropriate restriction enzyme. Digest 10μg of Yeastchromosoma ...

Steve Hahn Last Modified FriApr 252003 Wear gloves throughoutuse RNAse free solutions (either autoclaved or sterile filtered)and clean bench and pipetmen with 95% ethanol before use to eliminate any s ...

1 转座 ...

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RNA -gel b ...

【原理】 Southern 印迹是将电泳分离的 DNA 片段转移到一定的固相支持物上的过程。 DNA 分子经限制性核酸内切酶酶切，经琼脂糖凝胶电泳将得 DNA 片段按分子量大小分离，然后将含 DNA 片段的琼脂糖凝胶变性，并将单链 DNA 片段转移到硝酸纤维素膜或其它固相支持物上，而各 DNA 片段的相对位置保持不变，这种滤膜可用于杂交反应。利用 Southern 印迹法可进行克隆基因的酶切图 ...

常规转染技术可分为两大类，一类是瞬时转染，一类是稳定转染（永久转染）。前者外源DNA /RNA 不整合到宿主染色体中，因此一个宿主细胞中可存在多个拷贝数，产生高水平的表达，但通常只持续几天，多用于启动子和其它调控元件的分析。一般来说，超螺旋质粒DNA 转染效率较高，在转染后24-72小时内（依赖于各种不同的构建）分析结果，常常用到一些报告系统如荧光蛋白，β半乳糖苷酶等来帮助检测。后者也称 ...

There are ...

DNA Transfer1. Depurination of DNA fragments: Wash gel in 0.25 M HCl 5' (small gels) 7' (large gels) 2. Denaturation: Wash gel in (0.5 M NaOH 1.5 M NaCl) for 20' (small) to 30' (large). 3. Neutralizat ...

1 目的 ...

DNeasy® 96 Plant Protocol for Isolation of DNA from Fresh Plant Leaves Using the Mixer Mill MM 300 一、Important notes before starting （使用前的重要注释） 1、Take time to familiarize yourself with the Mixer ...

1.加入solution.III，经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实，有的漂浮在液面，有的贴在离心管壁上，一摇晃即破碎脱落下来？细菌的用量太少，导致产生的沉淀主要是盐分的沉淀，因为缺少变性的细菌蛋白和细菌基因组DNA 的缠绕，沉淀就显得不结实。解决方法：将细菌的用量增加。 2.加入soln.III，经10分钟离心后细菌沉淀怎么不结实，呈大块的水泡状，上清较少？（1）使用了过多的细菌，导 ...

近10年来，现代分子生物学技术越来越广泛地被用于人类疾病研究的诸领域，为了解病理状态下DNA的变化积累了新资料。目前认为，人类并非人们想像的那样稳定，诸如基因重排、扩增、缺失，突变和DNA甲基化类型改变等时有发生，这些改变对于基因表达和调控，以及疾病过程的发展与转归等方面均具有重要意义。 　　医院病理科档案中积存的大量石蜡包埋组织，是一个可靠的分子生物学研究的材料来源。在石蜡切片上进行原位杂交或原 ...

Methylati ...