DNA实验技术

生物芯片是近年来在生命科学领域中迅速发展起来的一项高新技术，是由微电子学、物理学、化学、计算机科学与生命科学交叉综合的高科技。 生物芯片可分为基因芯片、蛋白芯片和芯片实验室等几种。 蛋白芯片是将大量蛋白质分子按预先设置的排列固定于一种载体表面行成微阵列，根据蛋白质分子间特异性结合的原理，构建微流体生物化学分析系统，以实现对生物分子的准确、快速、大信息量的检测。 蛋白芯片反应结果的检测要依据标记的报 ...

摘要： 基因芯片技术是近年兴起的一项重要的生物技术。作者介绍了基因芯片的概念、分类、主要技术流程、用途、存在的问题和展望，并就基因芯片在猪繁殖中的应用和开发进行了初步阐述。 随着人类基因组计划（human genome project）即全部核苷酸测序的完成以及分子生物学相关学科的迅猛发展，越来越多的动植物、微生物基因组序列得以测定，生物科学研究的重心逐渐进入后基因组时代（postgenome E ...

TRIzol试剂适用于从细胞和组织中快速分离RNA。TRIzol试剂有多组分分离作用，与其他方法如硫氰酸胍/酚法、酚/SDS法、盐酸胍法、硫氰酸胍法等相比，最大特点是可同时分离一个样品的RNA\DNA\蛋白质.TRIzol使样品匀浆化，细胞裂解，溶解细胞内含物，同时因含有RNase抑制剂可保持RNA的完整性。在加入氯仿离心后，溶液分为水相和有机相，RNA在水相中。取出水相用异丙醇沉淀可回收RNA；用乙醇沉淀中间层可回收DNA；用异丙醇沉淀有机相可回收蛋白质。 TRIzol试剂可用于小量样品（50-100mg组织、5×106细胞）也适用于大量样品（≥1g组织、>107细胞）。对人，动物，植物组织，细菌均适用，可同时处理大量不同样品，整个提取过程在一小时内即可完成。分离的总RNA无蛋白质和DNA污染，可用于Northern Blot，dot blot，ployA筛选，体外翻译，RNase保护分析和分子克隆。在用于RT-PCR时如果两条引物存在于一个单一外显子内，建议用无RNase的DNaseⅠ处理RNA样品，避免出现假阳性。共纯化的DNA可用作标准，比较不同样品RNA的得

获得蛋白质的晶体结构的第一个瓶颈，就是制备大量纯化的蛋白质（>10mg），其浓度通常在10mg/ml 以上，并以此为基础进行结晶条件的筛选。运用重组基因的技术，将特定基因以选殖（clone）的方式嵌入表现载（expressionvector）内，此一载体通常具有易于调控的特性。之后再将带有特定基因的载体送入可快速生长的菌体中，如大肠杆菌（Escherichia coli），在菌体快速生长的同 ...

质谱仪一般由四部分组成：进样系统——按电离方式的需要，将样品送入离子源的适当部位；离子源——用来使样品分子电离生成离子，并使生成的离子会聚成有一定能量和几何形状的离子束；质量分析器——利用电磁场（包括磁场、磁场和电场的组合、高频电场、和高频脉冲电场等）的作用将来自离子源的离子束中不同质荷比的离子按空间位置，时间先后或运动轨道稳 ...

有的试剂需要60%浓度，如葡萄糖等，这么高的度是质量体积比（w/v）还是什么，是不是就是加60g葡萄糖然后用水补足至100ml啊? 固液的百分比一般是质量体积比（w/v）.60%的葡萄糖=60g葡萄糖用水补足定容至100ml. ...

实验中的一些好习惯加入试剂之前把它混匀一下以免放置时间长了浓度不均移液枪用完之后要归到最大计量的位置，防止久而久之弹簧失去弹性一定要记着关水浴箱，切记切记多和大家讨论，同时多关注别人讨论的经验，这几乎是最快提高的捷径了所有的试剂都自己配，出了问题才好找原因一、防止RNA酶污染的措施1. 所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr或更长时间。2. 塑料器皿可用0.1% DEPC水浸泡或用 ...

2007年QIAGEN技术讲座,PPT图片。

目的：类风湿关节炎（Rheumatoid arthritis，RA）是一个多基因多因素参与的病理过程。实验中通过建立与RA发病机制相似的胶原诱导性关节炎（Collagen—induced arthritis，CIA）大鼠动物模型，运用蛋白质组技术对正常大鼠和CIA大鼠模型不同时间点滑膜组织的蛋白质点进行比较分析，为鉴定CIA大鼠滑膜病变相关蛋白质及研究RA发病机制奠定基础。方法：用牛 ...

染色质免疫沉淀法（Chromatin immunoprecitation，ChIP）是研究体内DNA与蛋白质相互作用的重要工具。它可以灵敏地检测目标蛋白与特异DNA片段的结合情况，还可以用来研究组蛋白与基因表达的关系。核小体组蛋白可以发生多种翻译后的共价修饰，如乙酰化、甲基化、磷酸化、泛素化等，这些共价修饰与真核基因的表达密切相关。根据“组蛋白密码”假说，组蛋白的各种共价修 ...

Clontech公司最新推出的Living Colors Fluorescent Timer，是唯一一种能随着时间的延长而由绿色变为红色的的荧光蛋白报告基因。这种颜色可变的荧光蛋白为实时研究启动子的调控时效提供了可能：在活细胞或者活的生物体内，你不但可以看到某个启动子什么时候、在什么位置开始启动基因的表达，还可以观察到它什么时候关闭表达――这在以前是不可能实现的――而且由于这种报告基因是荧光蛋白， ...

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　　尽管我们现在对真核基因表达调控知道还不多，但与原核生物比较它具有一些明显的特点。 　　真核基因表达调控的环节更多 　　如前所述：基因表达是基因经过转录、翻译、产生有生物活性的蛋白质的整个过程。同原核生物一样，转录依然是真核生物基因表达调控的主要环节。但真核基因转录发生在细胞核（线粒体基因的转录在线粒体内），翻译则多在胞浆，两个过程是分开的，因此其调控 ...

摘　要：　叶绿体基因的表达在许多方面与原核基因表达相似，所以最早的理论认为叶绿体基因的表达与原核相似，是在转录起始水平上的调控，进一步的研究认为叶绿体基因表达调控是在不同水平上进行的如：转录水平的调节、转录后调节与修饰、翻译和翻译后修饰等。 关键词：　叶绿体；叶绿体基因组；表达调控 叶绿体基因组的特点是具相同或相关功能的基因组成复合操纵子结构。这一特点有利于叶绿体基因的表达与调控，例如rpoB-r ...

Hahn Lab (adapted from J.LeatherwoodPtashne lab) last modified MonAug 272001 Cell Growth 3 liters of cells are grown in YPD (3% glucose)to A600 of 3-5.Antifoam A (two drops from a P200 pipetman)is ad ...

Hattoti's protocol adapted to cell culture : Hattori MTugores AVeloz LKarin MBrenner D (1990)A simplified method for the preparation of transcrip-tionally active liver nuclear extracts.DNA Cell Biol.V ...

体外定点突变技术是研究蛋白质结构和功能之间的复杂关系的有力工具，也是我们在实验室中改造/优化基因常用的手段。蛋白质的结构决定其功能，二者之间的关系是蛋白质组研究的重点之一。对某个已知基因的特定碱基进行定点改变、缺失或 者插入，可以改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构，对突变基因的表达产物进行研究有助于我们了解蛋白质结构和功能的关系，探讨蛋白质的结构/结构域。而利用定点突变技术改造基因，相信大家也非常 ...

一、基因表达调控是生命的必需 基因表达 (gene expression)是指储存遗传信息的基因经过一系列步骤表现出其生物功能的整个过程。典型的基因表达是基因经过转录、翻译，产生有生物活性的蛋白质的过程。rRNA 或 tRNA 的基因经转录和转录后加工产生成熟的 rRNA 或 tRNA也是 rRNA 或 tRNA 的基因表达，因为 rRNA 或 tRNA 就具有在蛋白质翻译方面的功能。 基因组 ( ...

比起其它公司的原核表达系列来说Invitrogen有个非常突出的地方就是它的重组克隆技术。像之前Novagen大部分载体都是用传统的酶切、链接方式做重组质粒，但是Invitrogen的表达系统大量运用了它的TOPO技术和Gateway技术。 虽然现在在许多做科研的学生看来，能出实验结果是最重要的，中间的过程不是那么重要。可是只有创新的技术才能推动科学不断的进步，比如：如果我们一直采用手工法测序，那 ...

随着医学科学的发展及人们对深部真菌感染的重视，越来越多的新技术用于临床真菌的检测和鉴定，随机扩增DNA 多态性（RAPD）是在PCR基础上发展起来的一种新的基因分型方法。本文综述了假丝酵母菌RAPD分析技术应用的研究进展及前景。近年来，随着肿瘤、自身免疫病、器官移植、糖尿病、获得性免疫缺陷综合征（AIDS）等患者的不断增多，侵入性诊断治疗手段的广泛实施，各类免疫抑制剂和广谱、超广谱抗生素的 ...