DNA实验技术

近20年来，DNA甲基化的研究逐渐成为新的研究热点。此次有声技术讲座将会从DNA甲基化研究的整个实验流程和大家探讨实验中经常遇见的难题，和大家分享来自QIAGEN的DNA甲基化解决方案。

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，可供选择的方法非常多，乱花渐欲迷人眼，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。我们从两个方面，层层剥茧，分析最佳的实验方法。

快速TA克隆的突破 T载体是TA克隆载体的简称，就是利用载体的T末端和PCR产物的A末段连接而将目的基因克隆到载体中的方法。 目前市场上常见的T载体，根据连接方法可以分成两种： 方法 1、以T4连接酶进行连接的方法，这种方法的载体有promega、takara， 可以说这两家公司将这两种方法发挥到了很高的水平，转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连 ...

高分辨率熔解（High-resolution melting，简称HRM）分析是一门新兴的技术。它仅仅通过PCR之后的熔解曲线分析，就能检测PCR片段的微小序列差异，从而应用在突变扫描、序列配对和基因分型等多个方面。

从全血中提取DNA和RNA应该说是最基本的工作了，提取的DNA和RNA质量的好坏直接影响了下游的实验和分析，如何选择最适合的方法，成了很多人实验开始前最难以抉择的事情。

常用的基因转染技术是将外源基因导入靶细胞需要一定的载体和导入方法，基因转技术则是将纯化的含有靶基因的质粒DNA送入细胞内，并在细胞内表达。转染方法有多种，根据不同的细胞，贴壁或悬浮细所可选用不同的方法，其目的是要达到设置转染效率，影响转染产率的因素有多种，包括转染方法、操作技术、质粒 DNA的纯度、靶细胞的生长状态等。

活体电穿孔法(in vivo electroporation) 是将外源基因通过电场作用，导入动物目标组织或器官。由于这种方法能有效导入外源基因，可在多种组织器官上应用,并且效率较高。活体电穿孔法的原理很简单,在直流电场作用的瞬间,细胞膜表面产生疏水或亲水的微小通道105～115μm ,这种通道能维持几毫秒到几秒,然后自行恢复。在此期间生物大分子如DNA 可通过这种微小的通道进入细胞。近年来活体电穿孔法用于转基因研究的报道不断增多,在基因治疗方面的优势也日趋显著,是一种很好的活体基因导入方法。

QIAGEN公司作为作为全球生命科学解决方案的领先供应商一直致力于提供完整解决方案，我们的解决方案涉及生命科学的各个研究和应用领域。本期我们将为您提供表观遗传学中关于DNA甲基化状态研究的完整解决方案。

原位杂交组织(或细胞)化学 (In situ Hybridization Histochemistry，ISHH) 简称原位杂交(In Situ Hybridization)，属于固相分子杂交的范畴，它是用标记的DNA或RNA为探针，在原位检测组织细胞内特定核酸序列的方法。

本文主要介绍了影响泳动度的各种主要因素。

电泳是指带粒子在电场中向与自身带相反电荷的电极移动的现象。当蛋白质溶液的pH在蛋白质等电点的碱侧时，该蛋白质带负电荷，在电场中向正极移动，蛋白质溶液pH在蛋白质的等电点时静电荷是零，在电场中不向任何一极移动。

质粒载体中限制酶切位点的种类极为繁多，因而通常都有可能找到某种带限制酶切位点恰恰与外源DNA片段本身毫无二致的载体。

DNA合成技术已成为分子生物学研究必不可少的手段，并且已在基因工程、临床诊断和治疗、法医学等各个领域中日益发挥重要的作用。

质粒载体和外源DNA中限制酶切位点的性质

原位杂交，就是将标记的核酸探针与细胞或组织中的核酸进行杂交。本文介绍了原味杂交的操作流程。

目前市场上常见的TA克隆试剂盒，根据连接方法可以分成两种： 方法1：以T4连接酶进行连接的方法，这两种方法转化子比较多，阳性率也不错，唯一的不足就是连接的时间长。因为连接时间越长效率越高，一般快速连接方法需要半个小时到一个小时；达到最佳的效果，要过夜连接。

分子生物学的从业者们都知道EB染料的有害性。百泰克公司2009年推出了新一代的凝胶透射仪，可用于核酸和蛋白质电泳凝胶样品的观察、处理、分析和拍照。可以避免EB的影响，又可以影响实验的效果。

土壤基因组DNA快速提取试剂盒采用创新技术，采用酶法破碎，保证了基因组的完整性，极大的提高了DNA的得率，几乎土壤中所有的微生物DNA都能提取出来，能真正反映土壤中微生物的多样性！

本文对肽核酸PNA原位杂交进行了简要的介绍。

本文介绍了甲基化检测之亚硫酸氢盐修饰后测序的方法。