DNA实验技术

这篇文章可以帮助纠正一些常见的关于DNA（以及RNA）定量、纯度方面错误的信条。尤其是提取像土壤这类的环境样品的情况下。 提取环境土壤获取大量高纯度DNA比提取其它类型样品难度都要大，因为环境样品微生物裂解的复杂性和抑制因子的去除问题。而要定量分析从中提取得到的核酸就相对比较容易。可是如果定量、定性分析不得要领，你可能会误读结果，导致无谓反复试验甚至错过实验中产生的关键信息。 &n ...

作者：胡珺、王隽、伍约红 随着代谢组学的发展，已经有越来越多的领域开始在用代谢组学方法来进行研究，因此用于代谢组分析的样本也多种多样。本文拟从动物、植物、微生物等几个主要方面，对这些不同样本的制备方法做出相应介绍，旨在为各位研究人员的实验提供一个具体参考。 1、动物样本的制备方法 a) 血液样本制备 i. 采集血液样本，通常会在采集后于室温下放置30 min以上，等待蛋白质的凝结 ...

这周讨论一项常用的技术，即使常用但仍引起部分人核酸分离焦虑症。那就是基因组DNA的纯化去杂质。 场景是这样的：你有一份采自南太平洋中部一个偏僻小岛上首次发现的古老兰花品种根际土壤样品。你使用了非PowerSoil Kit法提取其中的微生物DNA。最终DNA含有太多杂质，无法PCR扩增。因此需要去除腐植酸等PCR抑制因子。你需要所有的核酸分子通过全基因组鸟枪测序…&he ...

关键词：细菌基因组测序；Roche 454测序平台；HiSeq 2000测序平台 Roche 454测序平台 HiSeq 2000测序平台 测序读长 300～700bp 100bp 对样品要求 2μg ...

1、PCR 产物测序时出现重叠峰 问题图1（模板中有碱基缺失，往往是单一位点（1-1）或两个位点（1-2）碱基缺失导致测序结果移码） 图1-1 图1-2 解决方法：将PCR 产物克隆到质粒（如T 载体）中挑单克隆测序，或将PCR 产物进行PAGE纯化（至少琼脂糖充分电泳后切胶纯化）后再进行测序。问题图2（PCR 产物不纯，含部分序列一致的两种以上的片段，长度不一） 图2 ...

单克隆抗体在现代生物医学中的作用越来越大，它不仅被广泛应用于生化和免疫检测，而且治疗癌症和自体免疫疾病的单抗药物也逐渐批准上市。因此单抗的制备和筛选具有其内在的重要性。 动物免疫 取4只6周龄雌性BALB/c小鼠皮下注射抗原（20 μg/只），第一次免疫与等量弗氏完全佐剂乳化，0.2 mL/只；两周后进行第二次免疫，抗原与等量弗氏不完全佐剂乳化，皮下注射，0.2 mL/只；两 ...

对于大规模生物科研的项目而言，生物样本的管理是重中之重。本视频主要介绍赛默飞生物样本库的入库流程，主要有以下几个部分内容：（1）样本信息预录入；（2）样本分装入库； 赛默飞生物样本管理整理解决方案 本视频来自赛默飞 ...

一、实验试剂 1. 使用前，将RNase A全部加入Solution I中并于4度保存。 2. 按下表用无水乙醇稀释DNA Wash Buffer，并于室温保存。 D6948-00B: 加入8 ml无水乙醇。 D6948-01B: 加入80 ml无水乙醇。 D6848-02B: 加入80 ml无水乙醇。 二、实验步骤 1. 取1.5-5 ml 菌 ...

一、实验原理 限制性内切酶切割后的DNA片断经过电泳后，按分子量大小被分开，排列在琼脂糖凝胶中，可以将特定的某条DNA带所在的凝胶切下来，加热或用特殊的试剂熔解凝胶，使DNA溶回到溶液中，再经过乙醇沉淀或过柱即可获得目的 DNA酶切片段。 二、实验试剂 1. 电泳缓冲液 2. 荧光染料 3. 电泳级琼脂糖粉 4. 10′加 ...

一、实验原理 Dynabeads Human Treg Expander offers a simple method for expansion of Treg cells that does not require antigen- presenting cells or antigen. Just add Dynabeads? Human Treg Expander and recombi ...

一、实验试剂 Absolute (96%-100%) ethanol 二、实验设备 1. Centrifuge with swinging-bucket rotor at room temperature capable of 3000 x g (such as Eppendorf 5810 with MTP rotor) 2. Adapter ...

一、实验原理 在DNA复制过程中，核苷的类似物5-溴脱氧尿嘧啶核苷（5-Bromodeoxyuridine简称BrdUrd）或5-碘尿嘧啶核苷（5-Iodo-2′-deoxyuridine简称IdUrd）可以代替核苷酸掺入新合成的DNA链，并占有胸腺嘧啶（Thymidine，T）的位置。哺乳类细胞在含有适当浓度的BrdUrd的培养液中经历二个分裂周期之后，其中期染色体的两个单体的DN ...

一、实验原理 提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。将RNA通过凝胶电泳使之在凝胶中分离出来，通过加入标准核酸分子（markers）对其进行鉴定，并用于转膜、杂交等。 二、实验试剂 1. DEPC 水的处理：用量筒量取去离子水2 L，在通 ...

1. Weigh 500 mg of glass beads in a 2 ml centrifuge tube add 0.2-0.5 g soil sample. Add 0.8 ml Buffer SLX Mlus. Vortex at maximum speed for 3-5 minute to lyse samples. For the best result A Mixer Mil ...

Note: The following protocol is based on using OBI’s vacuum manifold (Product No. VAC-03). 1. Set up vacuum manifold by following manufacturer’s instructions. 2. Place waste ...

一、材料 1. Resazurin细胞活力检测试剂盒（Biotium，Inc.30025） 2. 细胞：在本试验中，使用了三种人类前列腺癌细胞系进行检测。 （1）DU145（ATCC，HTB-81） （2）PC3（ATCC，CRL-1435） （3）LNCap（ATCC，CRL-1740） 二、仪器 1. SpectraPLUS酶标仪 &n ...

DNA电泳需要进行带型分析，在实验过程中常会发现所得的带型出现在这样那样的问题。在此，对DNA带型做了相应的分析。带型原因分析解决办法弱带或无带上样的DNA量不够增加DNA的上样量，聚丙烯酰胺凝胶电泳比琼脂糖电泳灵敏度稍高DNA降解避免DNA。 带型 原因分析 解决办法 弱带或无带 上样的D ...

1. 测序所用模板DNA的量一般按下面要求加入： 模板种类/长度 模板量 200 bp（PCR产物） 16 ng（120 fmol） 3000-5000 bp（超螺旋质粒DNA） 4 mg（2 pmol） 48 ...

材料和试剂 1. 乙醇 2. 异丙醇 3. 氯化钠 4. EDTA（乙二胺四乙酸） 5. SDS（十二烷基磺酸钠） 6. Tris，pH7.5 仪器 1. 研钵及研杵 2. 台式离心机（Eppendorf） 3. 振荡器（VWR） 步 ...

原理 电泳迁移率分析，也可称作迁移电泳，凝胶电泳分析，凝胶迁移率分析，条带移动分析或者凝胶阻滞分析，这种方法常用来研究蛋白质-DNA，蛋白质-RNA的相互作用，对照泳道（不含蛋白质的DNA/RNA探针）将出现单一的条带。如果蛋白质与片段结合，形成大的复合物，因此在凝胶上迁移的速度慢从来迁移率减低。 材料和试剂 1. DTT（Promega） ...