DNA实验技术

相关专题 张宁，王凤山 (山东大学药学院生化与生物技术药物研究所，山东济南250012 《中国海洋药物》杂志2004年第2期(总第98期) 摘要：DNA的提取是分子生物学研究的基础技术，提取的DNA的纯度及结构完整性是进行基因工程各项研究所必需的条件。近年来一些新的或改进的DNA提取纯化方法不断出现，本文对从陆生动物、植物、微生物以及海洋生 ...

相关专题 引物设计 引物设计开始之前：其实非常简单，不需要你下载任何软件，但是你得有一台电脑能上网。当然，最重要的是，你要很清楚用于做引物的模板序列，至于怎么找模板序列，不再本次讨论范围。另外，要先对PCR目的序列的长度有个大致估计。 第一步：找到Primer3的站点。你不用记住这个站点，但是要记住“Primer3”这个词，然后打开GOOGL ...

相关专题 在本章节我们解释了转染体系的关键组分对细胞转染实验的效率有何影响，并且合理的给予您一些关于如何使它们更有利于您研究方面的提示。 【组织培养试剂】 一般提示：优化您的细胞生长条件。只使用新鲜配制的培养基和添加剂，并经可能减少所用试剂的变更。 基础培养基—目前所使用的各种市售培养基(如，RPMI 1640和DMEM)。培养基的成分包括 ...

相关专题 作为生命科学领域的“圈内人”，如果你还不知晓近期基因组测序的飞速发展，那你就实在太out了。。。随着新一代测序技术的不断改进，新测序仪不断涌现，测序价格也越来越低，应用当然也越来越广。近两年，新一代测序技术广泛应用于全基因组测序，疾病关键基因的测定，以及宏基因组学。 然而由于这一领域的发展速度飞快，因此一些新接触的实验人员可能会感 ...

相关专题 问题三：你如何优化DNA提取的效率?你认为怎样才算是好的产量? (更多阅读专家建议：从FFPE样品中提取DNA的小技巧（上）） Sunil Badve 印第安那大学药学院 延长蛋白水解酶的作用时间。大于100 ng/ul就算是好的产量吧。 Mark Bouzyk 爱默里大学(EMORY UNIVERSITY)药学院 提取过程的关键 ...

相关专题 世界上绝大多数的组织样品是使用福尔马林固定石蜡包埋(Formalin-Fixed and Parrffin-Embedded，FFPE)的方法处理的。要想提取出其中的核酸信息，相当有难度，因为FFPE样品中的DNA和RNA已经部分降解了，且DNA往往与组蛋白紧密交联。但是这个领域的科学家们也不是等闲之辈，他们近几年已经摸索出了更有 ...

相关专题 随着MicroRNA（miRNA）研究的深入，很多人开始从miRNA的发现转入功能分析。miRNA抑制是一种确定miRNA功能的强大技术。如何开展，需要注意些什么？Exiqon公司的专家给出了五点建议。 1. 选择合适的抑制剂 若希望miRNA功能分析成功，首先要选择一个最适合您实验的抑制剂。 •检查您的目的miRNA是 ...

相关专题 为了对以个特定序列进行PCR做重复检测，需要三个不同的区域，每一个区域的具体技术操作和试剂在下面详细列出。 1、样品准备区这个区域专门用作样品的准备，在制备和操作用于核酸提取的试剂时应该采取预防措施：1)PCR产物和带有要扩增序列的DNA克隆不能在这个房间操作。2)组织培养物、组织标本和血清样品都带进样品准备间处理，以根据应用的需 ...

相关专题 ABI公司推出的310型测序仪具有应用广泛、自动化程度高、全自动电脑控制等特点，一经上市即得到广大科研用户的认同。本文介绍其具体的日常清洁维护和实验操作方法。 一.Pump Block的清洁及维护 在机器运行前，必须确认Pump Block是干净的，使用POP-6测序时，注意POP-6室温下4天须更换。 1. 打开310主机，然后 ...

相关专题 提取样品的总RNA后，一般根据RNA的凝胶电泳图来判断RNA的质量。由于RNA容易形成二级结构，因此常用甲醛变性胶来进行RNA电泳，得到的电泳图能真实反映RNA的质量状况。 一、试剂： DEPC（Sigma公司产品），MOPs（Bocherigmer公司产品），甲酰胺（Formamide，Sigma公司产品），溴酚蓝（Bromph ...

相关专题 胸腺内单分子标记阳性T细胞发育图，图片来自维基共享资源。 根据2012年2月26日发表在《自然-医学》期刊上的一篇研究论文，来自美国罗耀拉大学的研究人员报道了一种大有希望的新技术：它能潜在地将免疫系统杀伤性T细胞(killer T cell)变成更加强有力的对抗感染和可能对抗癌症的武器。 这种技术涉及传送DNA到免疫系统的抗原呈 ...

相关专题 RT-PCR核酸实验技术专题 随着现代生物学实验方法的快速发展和应用，关于我们的劲敌之一——癌症的研究和检测方法越来越多样，其中FQ-PCR技术占据了重要的一席之地，本文着重介绍了几种PCR技术在癌症中的强大应用之道。 1.单管荧光定量PCR技术的原理 单管荧光定量PCR(fluorogenic quantitative PCR F ...

相关专题 Life Technologies公司新一代Ion Proton测序仪将于本月上市。最先推出的是Ion Proton I芯片，适合外显子组测序。而在今年底或明年初，Life Tech将继续推出Ion Proton II芯片，用于全基因组测序。 据Life Tech透露，它已经收到了超过100台的订单。一些临床中心，包括波士顿儿童医 ...

相关专题 在过去20年间的研究中，RNA研究的主要方向多关注于编码蛋白的mRNA及其在细胞过程中的功能，比如疾病和发育等。但是随着研究的不断深入，研究者陆续发现了多种非编码RNA在生命过程中起着重要的调控作用，例如microRNA，siRNA，piRNA以及众多长片段非编码RNA。最近，研究人员逐渐认识到人类基因组中有至少10000个不编码 ...

相关专题 DNA文库的构建在物种基因组学研究、基因表达调控、基因片段分离和提取等实验中具有重要作用。本文介绍基因组文库的构建步骤和操作中需注意的因素以及BAC 提取DNA的两种方案。 一、分离基因组DNA(gDNA) 毫无疑问，高质量的基因组DNA对于基因组文库构建是至关重要的。需要通过经验来选择合适的基因组DNA 分离方法，在分离过程中保 ...

相关专题 基因的结构、功能分析及其表达调控是现代生命科学研究中的主要课题，而基因的分离和纯化是研究的基础。基因文库的构建使基因的分析变得简单而快捷。真核或原核细胞的染色体DNA经物理或化学方法使基因组DNA分裂成为一定大小的片段，而后选择适当的载体与这些片段进行体外重组，并将这些重组体转染细菌后，可得到一组含有不同DNA片段的分子克隆混合体 ...

相关专题 实验室的需求 生物学实验室研究产生大量的EST/cDNA序列，如何分析数据成为现实问题。应用人工上网用blast比对分析1000个EST，约需2个月的工作量，且结果单一，数据不可靠。 (1)分析体系处理仅需1-2个小时，并且可以得到深入的分析结果，数据准确可靠。 (2)分析体系的完善需求 目前已经实现过相应的系统， 我们在分析思路 ...

相关专题 DNA连接与转化 质粒DNA的转化 【原理】 转化是将外源DNA分子导入到受体细胞，使之获得新的遗传特性的一种方法。转化所用的受体细胞一般是限制-修饰系统缺陷变异株，即不含限制性内切酶和甲基化酶(R-，M-)。将对数生长期的细菌(受体细胞)经理化方法处理后，细胞膜、的通透性发生暂时性改变，成为能允许外源DNA分子进入的感受态细胞。进 ...

相关专题 DNA连接与转化 LB培养基 液态培养基 根据《分子克隆实验指南》(J.萨姆布鲁克 D.W.拉塞尔著)配制每升培养基应该在950 ml去离子水中加入： 胰化蛋白胨 10g 酵母提取物 5g NaCl 10g 摇动容器直至溶质溶解，用5mol/LNaOH调pH至7.0。用去离子水定容至1L。在15psi高压下蒸汽灭菌20min。 LB ...

相关专题 1. 实验目的和要求 通过本实验学习氯化钙法制备大肠杆菌感受态细胞和外源质粒DNA转入受体菌细胞的技术以及筛选转化体的技术。了解细胞转化的概念及其在分子生物学研究中的意义。 2. 相关知识及原理 感受态细胞(Competent Cells): 受体细胞经过一些特殊方法(如：CaCl，RuCl等化学试剂法)的处理后，细胞膜的通透性发 ...