DNA实验技术

相关专题 DNA连接与转化 背景： 在生物实验中相信大家都经常要倒平板，细菌培养，分子生物学实验等等。医药企业中倒平板更是家常便饭，环境监测、水监测、微生物检查等，初学者往往都倒不好，这里总结几点小技巧供大家参考： 方法： 一、防止倒皿时的冷凝： 1、有经验的都知道，手心不烫手背烫，这是一个经验数据，此时的温度在45度左右，最适合倒平板。 ...

相关专题 PCR参照物有内参和外参两种。在实验过程中，往往很容易混淆这两种参照物，把内参当成外参，而把外参当成是内参。那么，下面就用一个例子来说明什么是PCR外参?什么是PCR内参?他们的作用又分别是什么? 做real-time PCR，以GAPDH为参照标准，GAPDH和目的基因反应体系是在两个EP管中进行，结果以GAPDH/目的基因 为 ...

相关专题 一、实验目的 本实验目的了解PCR反应用来扩增DNA 特异性片段实验的的基本原理、实验方法和操作步骤，熟练掌握PCR反应基本体系配制和实验条件的设定。 二、实验原理 PCR(Polymerase Chain Reaction)即聚合酶链式反应是1986 年由Kallis Mullis 发现。这项技术已广泛地应用于分子生物学各个领域 ...

相关专题 PCR实验中引物设计的成功与否直接关系到整个实验的成败。PCR引物对于PCR实验来说相当于是穿针引线的这条线，如果没有这条线把实验给串起来，目的片段也就不能得到特异性的扩增。 现代计算机软件的发展突飞猛进，Oligo6和Primer Premier 5.0是带有引物设计功能的商业软件。熟悉操作该软件可以轻松的设计出需要的PCR引物 ...

相关专题 我们实验室主要是采用分光光度计测定RNA浓度，本人是刚步入实验室的菜鸟，总结了下师兄RNA浓度测定的方法。 其实今天的主要任务是测定一下昨天提出的总RNA的浓度。真怕结果不理想!测定浓度真的是一件大工程。首先要准备至少100ml的DEPC水，这是用来稀释RNA的浓度和清洗比色杯。还有就是滤纸片和滤纸条，可以用他们来吸取比色杯里残留 ...

相关专题 NCBI-做到最全最强大 NCBI的“electronic PCR(e-PCR)”工具是UniSTS资源库的一部分，可以用来寻找一段目的DNA片段中的STS标记物。UniSTS (http://www.ncbi.nih.gov/genome/sts/)能提供所有有关STS标记物的资料，包括引物序列、产物大小、作图信息和别名。与之相链 ...

相关专题 SNP是近年来基因突变的热点研究之一。它是指在单个的核苷酸上发生了变异，有四种不同的变异形式，而实际上只发生转换和颠换这两种。当科学家弄清了SNP的突变原理以后，他们就着手对SNP进行分析，以求找到疾病相对应的突变位点或者是进行个性化药物治疗研究。其中应用到的技术多达上百余种，其中包括有测序技术、质谱分析技术、HRM技术、Taqm ...

相关专题 SDS是一种阴离子去垢剂，化学名十二烷基苯磺酸钠，由于在高温条件下能裂解细胞并与细胞中多糖结合而被作为提取物质被广泛使用。SDS法提取主要应用于植物DNA的提取和质粒提取，本文对这两个实验操作步骤进行讲解。 SDS法提取植物基因组DNA 本方法由DellaportaWood和Hicks(1983)的方法修改而成。其基本原理是研磨的 ...

相关专题 还在为分子克隆一个实验循环漫长的等待时间而苦恼吗?克隆一回要多久?七天?两天?一天?那你就out了。1997年Invitrogen公司推出的TOPO克隆早就颠覆了之前的一切。这场克隆的革命使得TA克隆、PCR克隆或者其他的克隆都实现了突破，是的!5分钟就够了! TOPO载体的种类还在不断增加，应用范围包括普通的亚克隆、测序、体外转 ...

相关专题 RNA干涉是分子生物实验中一项强有力实验工具。其中siRNA是RNAi发挥效应所必需的因子，因此掌握siRNA实验和设计方法非常重要。关于设计siRNA目前尚无可靠的规律，不过，不少实验室和科研机构都开发了相应的siRNA设计软件。siRNA设计是一个需要由软件完成的工作，但其中也有一般规律可寻：1.起始密码子75-100个以后， ...

相关专题 RNAi由于可以特异地使基因沉默或表达量降低而成为生物实验的强有力工具。其中shRNA设计在慢病毒的构建上应用颇广，本文对shRNA设计原则和操作技巧进行介绍。 1.克隆到shRNA表达载体中的shRNA包括两个短反向重复序列，中间由一茎环(loop)序列分隔的，组成发夹结构，由polⅢ启动子控制。随后在连上5-6个T作为RNA聚 ...

相关专题 小小斑马鱼对人类科研的大大贡献 实验一 斑马鱼总RNA的提取【实验目的】 1、掌握提取总RNA的原理和技术。 2、学习和掌握控制RNA酶活性的方法。【实验原理】 分离纯净、完整的RNA对于分子克隆的实验是很重要的，而且是进行基因表达分析的基础。在总RNA中，75-85%为rRNA（主要是28S－26S/23S和18S/16S rRNA ...

相关专题 小小斑马鱼对人类科研的大大贡献 转基因动物(transgenic animal)是指基因组中整合有外源基因的一类动物，整入动物基因的外源基因被称为转基因(transgene)。 嵌合体动物(chimera mosaic animal)是只有部分组织细胞的基因组中整合有外源基因的动物，称为嵌合体动物(chimera mosaic an ...

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相关专题 世界上大多数生物体的遗传物质主要是核酸，无论生物处在生殖、生长、发育、变异等任何一个生命阶段都要受到核酸的调节。因此核酸成为人们了解生物的研究对象。核酸太小，我们无法用肉眼看到，只能通过显微和染色技术，我们才能看到它们。 一、DNA和RNA的简单结构 组成DNA分子的脱氧核糖酸主要有四种，即dAMP、dGMP、dCMP和dTMP， ...

相关专题 siRNA的设计是决定RNA干扰实验成功与否的关键步骤，然而并非每个siRNA都能有效引发基因沉默，因而siRNA的经验总结尤为重要，siRNA的设计工具也应运而生。因此，生物帮小编总结了部分帮友的成功经验供大家参考。 经验1：如果是自行设计siRNA的话，一个目标基因至少设计3-5个以上的siRNAs，平行实验以期提高成功率。据 ...

相关专题 酵母单杂交技术是一种研究蛋白质和特定DNA序列相互作用的技术方法，主要包括四个流程即：一、筛选还有报告基因的酵母单细胞株；二、构建表达文库；三、重组质粒转化至酵母细胞；四、阳性克隆菌株的筛选。 1.酵母单杂交的基本原理 酵母单杂交技术是1993年由酵母双杂交技术发展而来的，其基本原理为：真核生物基因的转录起始需转录因子参与，转录因 ...

相关专题 探针的原理及其应用 Beacon 技术：该技术以美国人 Tagyi 为代表。也是加入了荧光探针，但它是 环状的寡核苷酸探针，分别由茎部和环部组成， 两端分别标记 荧光报告基团和荧光猝灭基团，在无靶序列的情况下，探针始终是环状，报告基团的荧光被猝灭基团猝灭，使荧光检测仪检测不到荧光信号;而在有靶序列时，即在 PCR 的退火阶段探针与 ...