DNA实验技术

相关专题 重组DNA技术工具酶 组蛋白去乙酰化酶(HDACs)是一组在细胞染色质水平、通过诱导组蛋白去乙酰化来调控包括染色质重组、转录活化或抑制、细胞周期、细胞分化及细胞凋亡等一系列生物学效应的酶，特别是与细胞活化后的基因转录表达调控有关。组蛋白去乙酰化酶抑制剂(HDACIs)则是一类抑制HDACs活性的化合物。 ...

相关专题 催化核酸中磷酸二酯键的水解的酶统称为核酸酶。细胞内存在着多种不同的核酸酶。根据酶作用的部位，核酸酶可以分为外切核酸酶和内切核酸酶。外切核酸酶水解磷酸二酯键后从多核苷酸链的末端释放核苷酸残基;而内切酶可以在多核苷酸链内的不同位置水解磷酸二酯键。表列出了一些常用的来自不同生物的核酸酶以及它们作用的底物和生成的产物。 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 糖原磷酸化酶 磷酸化酶(phosphorylase)作用机理类似水解酶可以将A-B化合物分解为AOH和B-phosphate。 磷酸化酶(phosphorylase)作用机理类似水解酶可以将A-B化合物分解为AOH和B-phosphate。 学习时要注意磷酸酶(phosphatase)和磷酸化酶(phosph ...

相关专题 内参即是内部参照，它们在各组织和细胞中的表达相对恒定，在检测基因的表达水平变化时常用它来做参照物。其作用是校正上样量、上样过程中存在的实验误差，保证实验结果的准确性。借助检测每个样品内参的量就可以用于校正上样误差，这样半定量的结果才更为可信。一般要选择一个在处理因素作用的条件下不会发生表达改变的基因作内参。 在进行基因研究的过程中 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 For quantitating RNA levels from either polyA+ selected RNA or crude RNA preps. Solutions 10X Hybridization Buffer 0.4 M PIPES 12.1 g PIPES (Sigma #P6757) 4. ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 核酸酶保护法是一种用于生物化学和遗传学识别个人在异构RNA的提取样品RNA分子细胞实验室技术。 该技术可以识别一个或多个已知序列的RNA分子，即使在较低的总浓度 。提取的RNA先用混合反义 RNA或DNA探针是相辅相成的利益和互补链的序列或序列杂交 ，形成双链RNA(或DNA-RNA的杂交)。.然后将混合物接触到 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验探针的原理及其应用 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式，用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 对于放射性RPA，杂交双链进行变性聚丙酰胺凝胶电泳，用放射自显影或磷屏成像系统检测被保护的探针的信号。 对于非放的RPA，杂交双链经过变性聚丙酰胺凝胶电泳后电转移至尼龙膜，UV照射使被保护的RNA探针与膜交联而固定，再用试剂盒提供的链霉亲和素-辣根过氧化物酶(Streptavidin-HRP)和化学发光底物与膜上 ...

相关专题 1、引物延伸分析（primer extension analysis） 引物延伸分析用于定量mRNA的量，测定低丰度的mRNA的种类。另外引物延伸实验可标定转录产物的5`-端， 确定转录的精确起始。特异的末端标记的引物退火到RNA链的互补区域，随后用RNA作为模板，用反转录酶延伸引物得到cDNA，用变性聚丙烯酰胺凝胶电泳分析cDNA ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)即糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。本文主要介绍了核糖核酸酶保护分析实验的从试剂准备到、操作步骤以及实验结果全部的操作流程，供大家分享。 试 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 三种不同的核酸酶——S1核酸酶、RNA酶、外切核酸酶Ⅶ被用来进行RNA定量，确定内含子位置，以及用来鉴定在克隆的DNA模板上的mRNA 5′端和3′端的位置。当检测RNA被杂交到DNA模板上时，用核酸酶S1进行保护试验的分析;当检测RNA被杂交到来自DNA模板的RNA上时用RNA酶。外切核 ...

相关专题 重组DNA技术工具酶 外源DNA片段和线状质粒载体的连接，也就是在双链DNA5'磷酸和相邻的3'羟基之间 形成的新的共价链。如质粒载体的两条链都带5'磷酸，可生成4个新的磷酸二酯链。但如果质粒DNA已去磷酸化，则吸能形成2个新的磷酸二酯链。在这种情况下产生的两个杂交体分子带有2个单链切口，当杂本导入感受态细胞 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 1. Add appropriate volumes of RNA ( Try 5 and 10 ug RNA plus 600 or 800 pg dig labelled probe. 2. Include 2-3 yeast RNA samples/probe used. 2ul of 5mg/ml sto ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 The ribonuclease protection assay (RPA) is a highly sensitive and specific method for the detection of mRNA species. The assay was made possible by the disco ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 Ribonuclease Protection Assay contributed by James McCaughern-Carucci Yale University Most RNase Protection protocols require an overnight hyb with numerous ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 1 analysis of yeast mRNA using oligonucleotide probes Steve Hahn. last modified Sat Oct 17 1998 Mix the following in an 0.5 ml eppendorf tube: 10-20 microgra ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。 1。原理：双链RNA(杂交的)能够抵抗RNA酶的降解。 2。应用：检测RNA表达 3。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 S1 Nuclease Protection Assay End-label oligo (20-25 mer) 4 µl 5X T4 Kinase Buffer 5 µl ATP (7000 Ci/mmol) 10 µl water + oligo (200 ng) 1 µl T4 Kinase 1. 37 ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 核糖核酸酶保护实验(Ribonuclease protection assay，RPA)是近十年发展起来的一种全新的mRNA定量分析方法。其基本原理是将标记的特异RNA探针(32P或生物素)与待测的RNA样品液相杂交，标记的特异RNA探针按碱基互补的原则与目的基因特异性结合，形成双链RNA;未结合的单链RNA经R ...

相关专题 核糖核酸酶保护实验 RNA酶保护试验((RNase Protection AssayRPA)是通过液相杂交的方式用反义RNA探针与样品杂交，以检测RNA表达的技术。与Northern杂交和RT-PCR比较，RPA有以下几个优点： 1. 检测灵敏度比Northern杂交高。由于Northern杂交步骤中转膜和洗膜都将造成样品和探针的损 ...