DNA实验技术

mijiagaga 有郁闷问题想请教各位大侠：我做免疫共沉淀，从细胞中提取内源性表达的蛋白，按照常规方法做，可是最后银染总是没有条带？多谢多谢！woxingwosu 有几个问题需要确认一下：1. 你做免疫共沉淀（IP）的抗体是否可以用。WEstern能识别的抗体不一定能用在IP。2. 内源性蛋白的表达量。需要先确认一下这个蛋白的表达量，如果这个蛋白本来表达量就很低，那么做IP的难度就很大，这时候需要考虑过量表达这个蛋白了。或者需要 ...

sunside 大家好，最近在准备做DNA甲基化方面，想提取足够样本后一块做。请问提取人血样本后如何保存，是-20还是-80度保存？可以保存多长时间？我查了些，有人说解冻后会有溶血，对DNA提取有影响吗？另外想问一下，长期保存血样本对DNA甲基化程度会不会有影响？非常感谢！！！zhujoker 其实是抽了血样本以后立即提取DNA是最好的，不需要将血冻起来。长期保存血样本对DNA甲基化程度没有影响，但是时间长了就会丢失一部分 ...

lsdcfhyj 想请教大家，在我研究的信号转导通路中，转录因子要形成二聚体转移到核内与调控序列结合启动后续目的基因的表达，报告基因质粒含转录因子调控序列和荧光素酶基因，我在想如果用瞬时转染的话，那么质粒只在细胞质之中，并未整合到核基因组中，转录因子又必须是要转入核内与调控序列结合启动荧光素酶表达的，那瞬时转染质粒的细胞能用于报告基因分析吗？woxingwosu 用瞬时转染是可以用来做报告基因分析的，这类的例子不在 ...

三叶虫 大家好，由于我的基础不太扎实，希望各位战友能告诉我，这种是什么实验方法。简单说明其过程。1，transgenic mice that overexpress Runx2 under the control of a 2.3-kb mouse Col1a1 promoter。2，In dn-Runx2 transgenic mice under the control of the same2.3-kb mouse Col1a1 promoter。问题一，是上面是通过什么方法进行基因改造的，望战友简单说说其过 ...

阳光男孩儿 我现在关注的那个基因在一个模式生物中，只有一个拷贝。我想研究在另一个模式生物中的同源基因，检索数据库发现，在这个我想研究的模式生物中，此基因有两个同源基因，同源性在98%，而且此基因是高GC含量的基因，GC含量在某些区段在70%以上。我想通过RACE方法，得到全长cDNA，然后做克隆，及表达分析，但我目前遇到的问题是，如此高同源性的基因，我用RACE的方法，是否能将两个基因分别克隆出来，有没有更好的方法，使得 ...

lsdcfhyj 向大家请教关于双荧光素酶报告基因检测系统与单荧光素酶报告基因检测系统的问题，两者的区别我基本清楚了，只是我没弄清楚用于检测的细胞究竟是应该同时转染两种质粒（分别含虫荧光素酶报告基因和海肾荧光素酶报告基因）呢还是只需一个质粒上面同时含两种荧光素酶报告基因？还有一个问题是如果是要转染两种质粒的话，是只需在含虫荧光素酶基因质粒中插入所要检测的调控元件基因，还是两种质粒中的荧光素酶基因前都要插入调 ...

dengjie19841217 各位高手们求助老板让我做地方病的基因组学，不知如何下手，拜托各路高手给我点思路吧:Is_dxding 同求，不知道怎么下手freecell 这个明天比较广泛。建议缩小范围。http://www.baigoogledu.com/s.php?hl=zh-CN&q=%B5%D8%B7%BD%B2%A1++AND+%BB%F9%D2%F2%D7%E9%D1%A7&n=2本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯 ...

lsdcfhyj 将报告基因质粒转染到癌细胞中，是否都要共转染一个带有抗性基因的质粒来筛选阳性克隆？很多文献是这样做的，可是我认为报告基因质粒本身就带有抗生素标记基因，为什么还要共转染另一个抗性质粒？一直对着个问题很困惑，请懂这方面知识的前辈指点指点？还有就是质粒使用量的问题，我不清楚到底质粒用量与转染细胞之间到底是个什么样的比例合适，看了很多操作步骤，有的一个六孔板一孔就要用1到2微克，可是商家产品就有1微克 ...

hhyy601 别人赠予基因腺病毒质粒，邮寄过来的，拿到后，我该怎么办？多谢！freecell 版内以前有讨论的。如果是点在滤纸上的，将滤纸减碎，然后浸泡在TE溶液中若干时间。随后低速离心，取上清。用滤膜过滤。将消毒的TE溶液转化相应宿主菌扩增即可。whbf5 转化DH5a或者jm109这一类的菌中保种和扩增本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师兄微信号：sh ...

细胞微管 请教老师，他指点说下一步应该做基因表达谱，这样才“心里有底”，好开展深入研究。但是我不明白，基因表达谱这类的组学研究在科研思路中，例如一个story从刚发现到完成loop的过程中，究竟处于什么样的地位？第二个问题，请教各位老师，基因表达谱的研究结果应该是哪些基因表达增加哪些降低吧？那么从这样的结果中进行信息分析、分类和建立进化树，这些对我来说比较抽象的概念又怎样提示下一步的研究方向呢？灰常感谢！细胞微管 抱歉，因 ...

lsdcfhyj 请教前辈，将含荧光素酶报告基因的质粒转染到真核细胞中，建立稳定的细胞系，用哪种转染方法比较好？中间有什么细节是值得注意的chenjing198345 如果lab经费充裕的话可以用试剂盒包装慢病毒，然后感染真核细胞，完全按照protocol做就行，没啥特别的，sbi的kit不错。如果经费有限，一般是用磷酸钙转染法，这种方法在《分子克隆》里面有介绍，缓冲液的ph值很关键。lsdcfhyj 谢谢，但是我看很多外文 ...

小pig 请问做基因的甲基化体外实验一般需要多少钱才能做freecell 自己可以在网上搜索一下。http://www.google.com/#q=%E8%AF%95%E9%AA%8C%E6%9C%8D%E5%8A%A1+%E7%94%B2%E5%9F%BA%E5%8C%96&hl=en&ei=xB5kTLr3LI6gnwfbneTNAQ&start=10&sa=N&fp=a0727d8b40d6f463小pig freecell wrote:自己可以在 ...

yuyue2010 我要RORγt的基因序列号，可是在NCBI上检索出来的只有RORC，请问是一回事吗？谢谢！版主zhujoker留言:我想问一下朋友，你能不能把你描述的基因的物种以及NM号给出来，你请人家帮忙也得给一点好的提示吧，老是暗语！yuyue2010 对不起，老师。我要用Real-time PCR检测人血的RORγt mRNA水平，在NCBI上检索不到RORγt 的基因序列号，只有RORC的基因，请问老师我可以用RORC ...

悠悠妈 如何从整个基因中判断表位序列？请高人指点。。。版主freecell留言:以后求助问题，请尽量在标题把问题表述清楚freecell This link may be helpful for u:http://www.embraceregistry.net/service/netctl-prediction-ctl-epitopes-protein-sequencesdnazyme 我是外行，也想参加讨论。线性表位的预测作了很多工作，就像“沙发”位置的 ...

springhello 我分离的启动子内部有很多停止密码子，由于启动子是自己建立创造的，不是哪个基因的。请问，可以用吗？song333 no problem. these are just DNA sequence. stop codon is locates in an open reading frame.In your case, is NOT.springhello 谢谢song333本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的前沿资讯以及酷炫的实验方法的你，都可以成为师兄的好伙伴师 ...

longgyin8341 我想研究细胞在氧化应激损伤过程中核受体NFkB对于下游一些目的基因（如ICAM-1等）转录调控的影响，是不是需要把NFkB在基因组上的特异性结合元件克隆出来，与虫荧光素酶报告基因质粒构建重组质粒，然后转染细胞？若是如此：NFkb由于可以调控多种下游基因的表达，它在基因组上每个调控基因的结合序列都是特异的吗？或者说这段序列是固定的吗？如何在网上找呢？谢谢longgyin8341 继续求助中。。。 ...

parrot 5’-GACACTTAGCATTCCGATGAAGTG-3’是cox-2的一段启动子序列，TAGCATTCCGAT是其中的关键序列，请问怎样分析在不同物种间的保守性？请大家帮帮忙，谢谢！:)freecell Refer to:http://www.jsbi.org/pdfs/journal1/GIW06/GIW06P088.pdfhttp://www.biomedcentral.com/1471-2105/7/114parrot ...

sophiasoso 有哪位高手能解释一下吗？生化书上都找不到，看文献又看不懂。。。谢谢啦sophiasoso 自己顶一下，有人帮忙解释一下吗？song333 杂合子突变: alleles have different mutations or deletion纯合子突变: both alleles have the same mutation or deletionbigbang_0_0 杂合子突变是指其中一个基因是野生型的，而另外一条是突变型的湖心 他们的回答都没有会回答到问题的 ...

longgyin8341 最近想做虫荧光素酶报告基因，但是从来没有做过，想求院子里高手指教：我是要观察一种药物是否能作用于细胞内的几种核受体（NFkB，PPAR，ER（目前还不清楚究竟是哪个，需要分别试验））的启动子区域，影响这几个核受体的转录水平，从而影响细胞的一些功能（比如凋亡等）。计划将这三种核受体的启动子区域分别扩增出来，然后与虫荧光素酶（或其他报告基因）构建重组质粒。再分别转染细胞，加入药物处理，观察荧光素酶的 ...

欣童 最近想做外周血提取基因组DNA，然后做全基因组甲基化，芯片太贵了，希望大家提供经济实用的检测方法，最好有试剂盒，多谢kylincom110 做Solexa 测序吧silentdeath 测序比芯片贵得不是一点两点啊。。limitless http://www.zymoresearch.com.cn/有需要站短我fuminhb 那你最后是怎么做得全基因组甲基化，测序还是芯片？哪种好一点呢本文由丁香园论坛提供，想了解更多有用的、有意思的 ...