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一、反应曲线首先，我们了解一下化学反应的时间与吸光度一个曲线图，可以划分为四个区：延迟区、等速区、过渡区和平衡区，如下图所示：二、反应原理对于延迟区来讲，无规律可寻，对于指标检测没有意义。等速区对应的指标检测方法是速率法。速率法又称连续监测法，是在测定酶活性或用酶法测定代谢产物时，连续选取时间-吸光度曲线中线性期内4个以上测光点作为读数点，并以单位时间吸光度变化值计算结果。线性期就是此期间内各测光点之间的吸光度差值相等，此线性期对酶促反应的底物来说属于零级反应。其测光点一般设置在加入启动因子并孵育一段时间后开始，持续1-3min，一般应用于酶类项目，可以使用因数法来计算待测浓度。生化检测原理示意图 过渡区对应是固定时间法，是终点法中存在一种特殊情况，指在时间-吸光度曲线上选择两个读数点，此两点既非反应初始吸光度亦非平衡点吸光度，这两点的吸光度差值用于结果计算。目的是解决某些化学反应的非特异性问题，提高准确度。平衡区对应的是终点法，按测光点的个数分为：一点终点法、两点终点法。一点终点法是指在反应到达平衡点，即在时间-吸光度曲线上吸光度不再改变时，选择一个测光点计算待测物质浓度。两点终点法

一、血液样本的收集和处理1. 全血取新鲜血液加入到盛有抗凝剂的管中，轻轻颠倒混匀，充分抗凝，得到全血样本，置于冰上待测。2. 血清取新鲜血液，室温条件下静置30 min，待血液凝结，2000×g离心10 min，取上层淡黄色澄清液体即为血清，置于冰上待测。3. 血浆取新鲜血液加入到盛有抗凝剂的管中，颠倒混匀，充分抗凝，1000-2000×g离心10 min，取上层淡黄色透明液体即为血浆，置于冰上待测。注意事项：①抗凝剂的选择：根据不同抗凝剂的性能特征，选择合适的抗凝剂。实验室常用的抗凝剂有肝素的各种盐、EDTA及枸橼酸钠。生化实验一般建议用肝素抗凝。②样本保存：全血样本收集好后，若不能当天检测，4℃可保存1-2天。血清、血浆收集好后，若暂时不测定，可分装冻存备用，避免反复冻融，一般4℃可保存一周，-20℃可保存半个月，-80℃可保存一个月。特殊指标对样本有较高要求除外。二、组织样本的收集和处理1. 10%动物组织匀浆取0.02-0.2 g新鲜动物组织块，用2-8°C的PBS（0.01 M，pH 7.4）漂洗，去除血液，滤纸拭干，称重，放入匀浆容器中，按照动物组织重量（g）：匀浆介质体积

细胞亚铁含量增多是铁死亡区别其他细胞死亡方式的一个主要特征，其检测也是铁死亡研究最常见的指标之一。 下面整理了一些关于细胞亚铁检测的常见问题，助力大家更顺利地完成实验。 Q1：检测细胞亚铁需要多少细胞？本试剂盒每个样本需准备大约106个细胞。相比以往的亚铁离子比色法测试盒，样本需求数量大大减少。 Q2：细胞样本如何进行破碎处理？本试剂盒使用细胞裂解液对细胞样本进行处理，加入裂解液后，只需在冰盒上静置10分钟，即可离心取上清液待测，有效提升了细胞破碎效率，同时防止了亚铁离子的氧化。 Q3：为什么测定的标准品的OD值没有梯度？实验中的标准品为亚铁离子，在室温下放置易氧化。最好在使用前按需配制，尽量减少试剂配制完成后的放置时间。另外，优化的试剂盒中配置了专门的标准品稀释液，可以极大程度地延长标准品配制后的存放时间。 Q4：加入显色剂时，如何防止酶标板孔中产生气泡？酶标板孔中的气泡会导致仪器检测时读取错误的OD值。加入显色液时，可将移液器枪头贴近板孔内壁，缓慢加入，以减少气泡的产生，并使用“吸二打一”的移液器操作方式，来避免气泡的产生。 Q5：试剂盒的检测波长是多少？本实验的显色物质在593n

再生是机体修复受损、病变或衰老组织的重要过程。从低等动物到人类，不同物种具有不同程度的再生能力，并且这种能力随着物种的不断进化而逐步降低。例如，低等动物中的蝾螈能够实现断肢的完全再生，而包括人类在内的大多数哺乳动物仅具备有限的再生和损伤修复能力。在哺乳动物中，鹿角是唯一能够完全再生的器官。尽管高度进化的物种能在组织损伤时启动相应的再生修复程序，但这种再生修复的能力会随着年龄的增长而逐渐降低。众所周知，干细胞在组织再生和修复的过程中发挥着关键作用。例如，蝾螈可以通过形成芽基组织（一群去分化的具有干性的细胞）来完成肢体的再生。同样地，在每年的鹿角再生过程中，位于鹿角骨膜的鹿茸干细胞可以分化产生包含血管、软骨、骨、真皮和神经在内的完整鹿角器官。人类成体干细胞，如间充质干细胞，在多种组织和器官的再生修复过程中均起到关键作用，但是这些干细胞的数量和再生能力同样会随着机体年龄的增加而降低。虽然人们已经发现机体再生能力随进化和衰老而逐步丧失的规律，但其中的分子机制尚不明确。内源性小分子代谢物在不同物种间相对保守；然而，迄今为止，人们对能够调节衰老和再生的小分子代谢物还知之甚少。通过向自然界存在的低等

乳酸菌，是酸奶界赫赫有名的大人物，在人们的传统认知里是促进胃肠道功能的有益菌群，但是没想到啊没想到，这「浓眉大眼」 的乳酸菌也背叛革命了，竟然成为了胰腺癌的「帮凶」。 2022 年 2 月 8 日，加拿大多伦多大学 Tracy L. McGaha 团队在 Cell 子刊 Immunity 上发表了题为 Tryptophan-derived microbial metabolites activate the aryl hydrocarbon receptor in tumor-associated macrophages to suppress anti-tumor immunity 的研究论文，揭示了乳酸菌通过代谢食物中的色氨酸激活肿瘤相关巨噬细胞（Tumor-associated macrophage，TAM）发挥促进胰腺导管癌生长的机制。色氨酸（Trp）是人体必需氨基酸之一，其代谢产物具有免疫、代谢、神经调节等功能， Nature reviews 杂志在 2019 年发表的一篇综述文章中就详细描述了色氨酸代谢产物在中枢神经疾病，感染性疾病，自身免疫疾病，肿瘤等疾病中发挥的作用。

如今，全球有成千上万的人因为脊髓损伤而导致瘫痪，目前仍无有效的治疗方法。最近，在顶级期刊上同时发表的两篇文章为脊髓损伤造成的肢体完全瘫痪的患者们重燃了希望！1. 首次设计出用于治疗瘫痪的人类脊髓植入物2022 年 2 月 7 日，发表在著名期刊 Advanced Science 上的一项研究中，以色列特拉维夫大学的科学家们，依靠人类细胞和材料首次设计出一种功能性 3D 人类脊髓组织，并将其植入以慢性瘫痪为特征的实验室小鼠模型中。结果表明，在 80% 的测试对象中成功恢复了行走能力。研究成果（图源：Advanced Science）这项开创性研究是由特拉维夫大学 Sagol 再生生物技术中心负责人 Tal Dvir 教授领导的实验团队完成。特拉维夫大学 Sagol 再生生物技术中心负责人 Tal Dvir 教授（图源：Sagol 再生生物技术中心）Tal Dvir 教授解释说：「我们的技术是从患者身上采集腹部脂肪组织。这种组织与我们体内的所有组织一样，由细胞和细胞外基质组成。在将细胞从细胞外基质中分离出来后，使用基因工程对细胞进行重新编程，使它们恢复到类似胚胎干细胞的状态。另外，我们从细

本周学术君为大家带来最新一周的 CNS 科研进展，佳节过后助力小伙伴们以最快速度投入科研生活！1. Neuron：慢性压力引起抑郁的原因抑郁已成为现代人常见的精神疾病。2022 年 2 月 2 日，浙江大学脑科学与脑医学院崔一卉团队在 Neuron 杂志发表研究论文 Hypothalamus-habenula potentiation encodes chronic stress experience and drives depression onset。该研究以慢性束缚应激模拟慢性压力过程，在小鼠上诱导出持续稳定的抑郁状态，证明 LH-LHb 突触增强是压力诱导抑郁形成的决定性因素，为预防压力引起的抑郁症提供了药物靶标！图 1：来源 Neuron2. Nature：揭示新型抗化脓链球菌感染免疫应答机制A 族链球菌（GAS）是自然界广泛存在的一种强毒力致病菌。2022 年 2 月 2 日，中国科学院上海巴斯德研究所刘星课题组在 Nature 杂志发表研究论文 Streptococcal pyrogenic exotoxin B cleaves GSDMA and triggers p

血小板，是血液中不可或缺的组成部分，循环血液中的血小板一般处于静止状态，当血管破裂时会大量聚集，在止血过程中发挥着重要作用。当前，使用供体来源的血小板输血治疗出血性疾病面临着很大挑战，因为它们的可用性有限，污染风险高，且保质期短（5～7 天）。人造的血小板模拟物可以通过模拟血小板的粘附、聚集和促凝血功能来解决这些挑战。 2022 年 1 月 26 日，来自美国凯斯西储大学生物医学工程系的 Anirban Sen Gupta 团队在 Science Translational Medicine 上发表了题为 Platelet-mimicking procoagulant nanoparticles augment hemostasis in animal models of bleeding 的研究性论文，开发了新一代人工血小板，可以更快地止血。 在过去十年中，Sen Gupta 和他的团队开创了人造血小板系统的研究，致力于推进治疗技术，应用于止血、溶栓和炎症。图片来源：Science Translational Medicine 研究内容 设计和表征 PPNs 首先，研究者使用人血浆在

「惟草木之零落兮，恐美人之迟暮」，流光易逝，盛年难再，最终衰老都会成为每个人不得不面对的现实。分子损伤累积并导致衰老和衰老相关严重疾病的发展。在某些人身体中，这些分子过程比其他人更强烈，这种情况通常被称为加速衰老。科学家通过使用衰老的数字模型，将其形象地称为衰老时钟，可以在衰老相关疾病显现之前检测到衰老速度的加快，此类模型还可用于推导个人和人群水平的抗衰老疗法。2022 年 9 月 28 日，由 Deep Longevity 公司与美国和中国科学家领导的一项国际合作，在 Aging-US 期刊上发表了题为 Psychological factors substantially contribute to biological aging: evidence from the aging rate in Chinese older adults 的研究性论文。本文开发了一个新的衰老时钟，它使用 11,914 名中国成年人的血液和生物特征数据进行了训练和验证，用于测量多种因素对衰老速度的影响。研究发现，在有中风、肝病和肺病病史的人、吸烟者以及精神状态脆弱的人中，其衰老明显加速。值得注意的是

睡眠与身体健康息息相关，机体免疫、新陈代谢等过程都依赖于睡眠。成年人的正常睡眠时间大约为 7～8 小时，然而由于熬夜、失眠等多种因素的影响，睡眠不足已成为一种普遍状态。 2022 年 9 月 21 日，一篇发表在 Journal of Experimental Medicine（IF = 17.579）的最新研究 Sleep exerts lasting effects on hematopoietic stem cell function and diversity，该研究表明长期睡眠不足会对造血干细胞产生持久的不良影响。具体来说，睡眠不足会重构造血干细胞和祖细胞（HSPCs）的表观基因组，并增加其增殖，通过加速遗传漂移减少造血克隆多样性，对免疫系统产生负面影响。 在小鼠中，睡眠碎片化对 HSPCs 表观基因组同样会产生持久的影响，使其倾向于髓系，并启动细胞发生更严重的炎症爆发。在人类中，睡眠限制会改变 HSPCs 表观基因组并激活造血。这些研究结果表明，睡眠通过校准骨髓造血干细胞的表观基因组、抑制炎症输出和维持克隆多样性来减缓造血系统的衰退。图片来源：Journal of Expe

导读「饭后百步走，活到九十九」是我们耳熟能详的养生谚语。当前，计算、记录每日步数已成为大家实现体育活动目标的一种流行方法，并且越来越多的证据表明，经常步行可作为预防慢性疾病和过早死亡的重要干预措施。但关于每天步行多少步数才能对健康产生有益影响，多项研究有着不同的结论。近日，来自澳大利亚悉尼大学和南丹麦大学的研究人员合作在 JAMA Internal Medicine 和 JAMA Neurology 期刊上分别发表了两篇题为 Prospective Associations of Daily Step Counts and Intensity With Cancer and Cardiovascular Disease Incidence and Mortality and All-Cause Mortality 和 Association of Daily Step Count and Intensity With Incident Dementia in 78430 Adults Living in the UK 的文章，基于大队列人群的数据和严格的统计分析，他们的研究结果发现，随

肥胖，已成为威胁人类健康的全球性公共卫生问题，肥胖者更容易出现包括 2 型糖尿病、心脏病和中风等一系列代谢相关的疾病。自 1980 年以来，全球肥胖率几乎翻了一番。炸鸡、汉堡、冰淇淋，这些让人发胖的高脂肪食物往往让人难以抗拒，但究竟为什么我们总忍不住想吃高脂食物呢？一项新研究揭示了背后的奥秘，发现肠道和大脑之间的联系驱动着我们对脂肪的渴望。来自哥伦比亚大学的研究团队将这一研究以 Gut-Brain Circuits for Fat Preference 为题发表在近日的 Nature 杂志上。该研究发现，进入肠道的脂肪会触发肠道的信号，这种信号沿着神经传导到大脑，驱动对高脂肪食物的渴望。这一研究提出了干扰这种肠脑连接的可能性，以帮助阻止不健康的饮食选择，并解决因脂肪和糖的过度消费而引起的日益严重的全球健康危机。图片来源：Nature该实验室在之前的研究中发现，葡萄糖激活了一个特定的肠脑回路，在肠道中存在糖的情况下，该回路与大脑进行通信，而无卡路里的人造甜味剂则没有这种效果，这可能解释了为什么无糖苏打水并不能够让我们感到满足。图片来源：Nature为了探索小鼠对膳食脂肪的反应，研究团队为

关于血型，有着多种多样的讨论，有些甚至听起来十分「玄学」。比如，O 型血的人更招蚊子，B 型血的人容易发胖……在临床研究中，也有不少研究发现不同的血型与疾病之间存在着某些联系。2022 年 8 月 31 日，一篇发表在 Neurology 上的最新研究将一个人的血型与早期中风的风险联系了起来。发现 A 型血的人患早发性中风的风险比其他血型的人更高。图片来源：Neurology 研究人员通过对 48 项关于遗传和缺血性中风的过往研究进行了荟萃分析，其中包含了近 17000 名中风患者和近 600000 名从未经历过中风的健康对照人群的数据。在中风患者中，又分为早发性中风（发生在 60 岁之前的中风）和晚发性中风（发生在 60 岁以上）。 他们研究了所收集的遗传信息，以确定与中风相关的遗传变异，最终发现了早发性中风与一个染色体区域有关，这个染色体区域中包含了决定 ABO 血型的基因。 ABO 血型是根据人的红细胞膜上是否存在抗原 A 与抗原 B 而将血液分成 4 种血型。红细胞膜上仅有抗原 A 为 A 型血，只有抗原 B 为 B 型血，同时存在 A 和 B 抗原则为 AB 型血，而 O 型

示例：Jurkat细胞用1μM喜树碱(Camptothecin) (左)或未加药 (右)处理4h，FITC-Annexin V/PI荧光双染细胞凋亡检测试剂盒染色后，流式细胞仪荧光检测。Annexin V-FITC单阳性细胞为早期凋亡细胞，Annexin V-FITC和PI染色双阳性的细胞为坏死细胞或者晚期凋亡。PI单染色阳性位裸核细胞。实测数据可能会因细胞类型、细胞凋亡情况，检测仪器等的不同而存在差异，图中数据仅供参考。流式检测细胞凋亡的数据分析方法：1） 选中所有颗粒，将FSC和SSC设置成对数坐标轴模式备用；2） 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道（7-AAD与此类似），选取双阴细胞群；3） 在双阴细胞门中，将横轴和纵轴分别设成FCS和SSC，将数据呈现方式改为轮廓图，找到细胞碎片，划出碎片门，应用于所有细胞；4） 在所有细胞中，反选碎片门，得到所有细胞；5） 将横轴和纵轴分别设成Annexin通道和PI通道，参照未经药物处理的对照组，划出十字门，确定不同群细胞的比例。

一、线粒体膜电位检测原理线粒体膜电位下降是细胞凋亡早期的标志性事件，发生在细胞核凋亡特征（染色质浓缩、DNA断裂）出现之前，一旦线粒体膜电位崩溃，细胞凋亡便不可逆转。JC-1是一种广泛用于检测线粒体膜电位∆Ψm的理想荧光探针，可以检测细胞、组织或纯化的线粒体膜电位。JC-1有单体和多聚体两种存在状态，两者发射光谱不同。在正常细胞内，线粒体膜电位较高，JC-1聚集在线粒体的基质中，形成聚合物，可产生红色荧光；凋亡早期，线粒体膜电位降低，JC-1不能聚集在线粒体基质中，此时JC-1为单体，可产生绿色荧光。通过JC-1从红色荧光到绿色荧光的转变可检测到细胞膜电位的下降，可将JC-1荧光颜色的转变作为细胞凋亡早期的检测指标。常用红绿荧光的相对比例来衡量线粒体去极化的比例。JC-1单体的最大激发波长为514 nm，最大发射波长为529 nm；JC-1聚合物的最大激发波长为585 nm，最大发射波长为590 nm。在流式图上表现为FL1和FL2双阳性，而凋亡细胞则大多为FL1单阳性。 二、线粒体膜电位检测实验操作指南1．根据实验需求配制1× JC-1 Assay Buffer 和JC-1染色工作液

一、实验原理细胞活力检测试剂盒(CCK-8) 可用于简便而准确的细胞增殖和毒性分析。其基本原理为：该试剂中含有WST-8【化学名：2-(2-甲氧基-4-硝基苯基)-3-(4-硝基苯基)-5-(2,4-二磺酸苯)-2H-四唑单钠盐】，在电子载体1-甲氧基-5-甲基吩嗪鎓硫酸二甲酯（1-Methoxy PMS）的作用下被细胞中的脱氢酶还原为具有高度水溶性的黄色甲瓒产物（Formazan dye）。生成的甲瓒物的数量与活细胞的数量成正比。因此可利用这一特性直接进行细胞增殖和毒性分析。CCK-8法是用于测定细胞增殖或毒性实验中活细胞数目的一种高灵敏度，无放射性的比色检测法,可替代传统的MTT法。 二、用途药物筛选、细胞增殖测定、细胞毒性测定、肿瘤药敏试验等。 三、优点使用方便，无需洗涤细胞，不需要放射性同位素和有机溶剂；CCK-8法能快速检测；CCK-8法的检测灵敏度很高，甚至可以测定较低细胞密度；CCK-8法的重复性优于MTT 法，产生的formazan 是水溶性的，减少因洗涤和溶解带来的误差；CCK-8法对细胞毒性小，可以多次测定选取最佳测定时间，与MTT 方法相比线性范围更宽，灵敏度更高

Annexin V实验对照设置Annexin V是常用的检测细胞凋亡的方法，一般通过流式细胞仪来检测。为保证实验结果的准确性，方便后续数据分析，通常需要设置不同对照实验组。①样本不带自发荧光：②样本带自发荧光空白对照：调节阈值和仪器电压。阴性对照：排除实验操作对实验结果的影响，扣除荧光背景，同时还可以作为实验组划门的依据。单阳对照：调节补偿，同时也可以辅助调节该通道的电压，防止信号超出仪器接受范围。注意事项：单阳对照组细胞一定要用明显有凋亡的细胞，因为调节补偿需要有足够的阳性信号样本带自发荧光需要设置三管单阳对照，确保每一管都只有一种荧光实验组：检测实验结果。Tips：样本为贴壁细胞：细胞培养基中漂浮的细胞需要收集，与后续收集的贴壁细胞一起检测避免人为操作带来的细胞损伤，如：胰酶消化时间要适宜，消化贴壁细胞时操作要轻柔等尽量不使用含EDTA的胰酶，因为EDTA会影响Annexin V与PS的结合。如果一定要用含EDTA的胰酶，终止消化后要将细胞洗涤干净，尽量去除EDTundefined细胞比较难消化时可以分批次进行消化，避免先消化下来的细胞被过度消化导致假阳性结果

Annexin V是一种钙离子依赖性磷脂结合蛋白，与磷脂酰丝氨酸PS有高度亲和力，可通过细胞外侧暴露的PS与凋亡早期细胞胞膜结合，将Annexin V标记上荧光染料利用流式细胞仪或荧光显微镜可检测细胞凋亡。由于凋亡晚期或坏死细胞膜完整性丧失，细胞核染色液可进入细胞内染色细胞核，搭配Annexin V使用可将处于不同凋亡时期的细胞区分开。 A．悬浮细胞：按照实验方案进行凋亡诱导，300 g离心5 min，弃上清，收集细胞，用PBS洗涤细胞一次，轻轻重悬浮细胞并计数。取1~5 × 105重悬的细胞，300 g离心5 min，弃上清。加入500 μL稀释成1 ×的Annexin V Binding Buffer工作液重悬细胞。细胞悬液中加入5 μL的荧光素标记-Annexin V和5 μL的细胞核染色液。轻柔涡旋混匀后，室温避光孵育15~20 min。反应完成后立即上机检测。如不能及时检测，请于冰上避光静置并于1 h内完成检测。检测1）流式细胞仪检测处理好的样本在流式细胞仪上检测。2）荧光显微镜分析取一滴用荧光素-Annexin V/细胞核染色液双染的细胞悬液（4步骤处理过的细胞悬液）于载玻

一、TUNEL法的实验原理细胞发生凋亡时, 染色体DNA双链或单链断裂产生大量的粘性3'-OH末端，可在脱氧核糖核苷酸末端转移酶(TdT)的作用下，将脱氧核糖核苷酸和荧光素、过氧化物酶、碱性磷酸酶或生物素形成的衍生物标记到DNA的3'-末端，从而可进行凋亡细胞的检测，这类方法称为脱氧核糖核苷酸末端转移酶介导的缺口末端标记法(terminal -deoxynucleotidyl transferase mediated nick end labeling, TUNEL)。由于正常的或正在增殖的细胞几乎没有DNA的断裂，因而没有3'-OH形成，很少能够被染色。由此，TUNEL成为了检测DNA片段化(细胞凋亡)的最常用方法。(以TUNEL法细胞凋亡检测试剂盒(增强型，绿色荧光)为例)TUNEL检测：使用20 U/ml Dnase处理Hela细胞10分钟。 二、TUNEL实验中关键步骤1. 充分脱蜡和水化。脱蜡前可先将切片在 60ºC烤片 20 min，再使用二甲苯脱蜡2次，每次 5-10 min;而水化一般建议用梯度乙醇从高浓度到低浓度浸洗，便于后期试剂能充分、均匀的结合反应。2. 把握好细

一、检测原理Caspase (Cysteine-requiring Aspartate Protease)是在细胞凋亡过程中起重要作用的蛋白酶家族。Caspase在正常状态下以酶原的形式存在于胞浆中，没有活性；在细胞发生凋亡阶段，Caspase被激活，活化的Caspase可裂解相应的胞浆胞核底物，最终导致细胞凋亡。Caspase分光光度法检测试剂盒的原理是将Caspase序列特异性的多肽偶联至黄色发光基团pNA (p-nitroaniline)。当该底物被活化的Caspase剪切后，黄色发光基团pNA游离出来，可通过酶标仪或分光光度计（λ=405nm 或400nm）测定其吸光值，通过测定吸光度来检测Caspase的活性。 二、自备试剂PBS、蛋白定量试剂盒(Bradford法,选用) 三、实验操作指南1．准备工作：A、 裂解液溶解后混匀，冰浴备用。B、 裂解液工作液制备：每50 μL裂解液中加入0.5 μL DTT，冰浴备用。2．样本处理：A、悬浮细胞1） 诱导完成后的细胞，2000 rpm离心5 min，弃上清，收集细胞，PBS轻轻重悬细胞并计数。2） 2000 rpm离心5 min