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基因的体外定点突变是常用的分子实验技术，主要用于研究蛋白质结构与功能关系或者验证 microRNA 与靶基因是否结合。今天为大家介绍下基因突变质粒的构建原理与方法。第一阶段：野生型质粒构建1. 引物设计：根据需要验证的基因序列，设计需要扩增的基因片段引物。引物设计方法如下：（1）引物 F：5’ 端 - 保护碱基序列 + 限制性内切酶 1 酶切位点序列 + 基因正向引物序列 - 3’端（2）引物 R：5’ 端 - 保护碱基序列 + 限制性内切酶 2 酶切位点序列 + 基因反向引物序列 - 3’端通过加入基因组 DNA 模板以及设计 ...

MCAO 实验全称即大鼠中动脉阻塞实验，是脑缺血常见动物模型。科研一线的小伙伴是不是每次做起来 MCAO 实验，都是腰酸背痛腿抽筋，哈哈，教你几招迅速搞定老鼠君们的办法，让你分分钟飞起来~~首先，你得有 helpers！MACO 实验简单分为几个步骤：麻醉 + 钝性分离 + 插线栓 +（拔栓）+ 缝合【如果需要 Reperfusion 则需要拔栓，否则直接缝合就行~】敲黑板！以上 5 个步骤都需要一个 helper，流水线操作，一只老鼠待在每个小伙伴儿面前不足 1 分钟，保证实验既快又有条 ...

做个生物实验也是够苦逼的啊，不止结果要好看光鲜，还要做定量…… 也是醉了。明明 western blot 结果做的那么漂亮，一眼就看出来差异了，还需要定量？！思量起来，这个也还算简单，忍了吧。。。but… 辛辛苦苦做的免疫组化（或荧光）也需要定量——你当搬砖就可以随便使唤了吗？花花绿绿，斑斑驳驳，肿么分析 ？还好，我有这本秘籍，一定要看完哦。 进入正题准备工作首先，你需要下载 imageJ，然后下载 IHC-Toolbox 插件，并放入 imageJ 的安装目录下的 plug ...

如果「Output Styles」中未出现「EndNote Export 」，就点击「Open Style Manager」，在打开的文本框中选中「EndNote Export」并确认. 之后「EndNote Export」就会出现在「Output Styles」中。3. 点击「File」，在下拉菜单中选中 「Export」。4. 在弹出的保存对话框的「文件名」中指定文件名，确认「保存类型」中的类型为「Text File ~undefined.txt)」，然后点击保存到目的文件夹中。（我保存到桌面中）5. ...

辛辛苦苦提完 RNA，逆转录后一个个孔加完引物和模板，最后进行 RT-PCR，你以为这样就可以美滋滋地坐等结果了？等到一幅下面这样的结果图，不知道对于刚接触 RT-PCR 的你来说内心是否是崩溃的？这是啥？怎么看？别急，让我慢慢跟你介绍，看完后你就能准确的分析出你的 RT-PCR 结果了。（这里以 7500 软件为例进行介绍）1. 首先设置好内参和对照组（在 Analysis Settings 处），一般我们在上机前会对应设置好的，如果设置好的话可以直接跳至第 3 点。如果 ...

元元上回用 targetscan 和 starbase 告诉大家查找 miRNA 结合位点，如何用数据库查找 miRNA 结合位点（今天学的是寻找基因的 3’UTR 和 miRNA 的碱基序列，最终预测 miRNA 与目标 mRNA 在 3’UTR 的结合位点）例如咱们在 starbase 看到如下结果：划红线的结果是 miR34A-5P 与 BCL2 存在结合位点，有三个数据库预测到这种关系。现在咱们用 RNA22Sites 这个网站也来寻找 miRNA 结合位点。进入这个网站：https://cm.jefferson. ...

相当多的蛋白质行使功能的时候并不是单打独斗的，蛋白质们通过蛋白质相互作用形成复合体然后进行工作，在工作的过程中，蛋白质们也可以通过更换相互作用的伙伴，从而改变蛋白质复合体的功能。因此，研究蛋白质的相互作用成为研究蛋白质功能和作用机制的最为重要的环节之一。另外，蛋白质相互作用的本质其实是三种力，氢键，分子间作用力（范德华力）和疏水力，因为这三种力的作用距离都非常的短，所以相互作用的蛋白我们通常认为它们必定相互接近 ...

今天给大家分享一篇 lncRNA 的文章（Self-Recognitionof an Inducible Host lncRNA by RIG-I Feedback Restricts Innate Immune Response），文章发表在 Cell 上，通讯作者为曹雪涛院士。RIG-I 是一种模式识别受体，它能够识别外源性病毒 RNA（dsRNA），之后 RIG-1 的半胱天冬酶募集结构域（CARD）通过 TRIM25 进行 K63 连接的泛素化。TRIM25 的 RING 和 SPRY 结构域介导其与 RIG-I 的相互作 ...

学霸君已经简要介绍了 Quantity One 蛋白定量的前两步——创建泳道和不同泳道的背景排除——如何正确使用 Quantity One 进行蛋白定量？接下来介绍创建条带、高斯建模与结果分析。 创建条带前面我们已经识别和分析了电泳图的泳道，下面我们开始讲电泳条带。在这里要明确两个名词：「Lane」 指电泳泳道，「Band」 指电泳条带。1. 电泳条带的识别：和前面的 Lane 一样，我们首先要对 Lane 上的 Band 进行识别。识别方式同样分为自动识别和人工识别。自动识别的 ...

代谢组学是现在医药领域用来探究某种疾病或药物作用机制的一种热门手段。目前代谢组学的研究主要采用三种技术平台：LC-MS、NMR 和 GC-MS。这三种技术各有利弊，相对来说，LC-MS 对于代谢物的检测最为全面。对于 LC-MS 代谢组学方法得到的代谢物指认，Xcalibur 软件和 Metlin 数据库最为实用。下面我们就讲一下 Xcalibur 软件和 Metlin 数据库的使用方法：1 . 找到想要解析的数据，双击，出现如下界面，激活右上角色谱图光标，使其变绿，即 ...

做肿瘤研究的人，很少有不知道 transwell 实验的，它是用来研究肿瘤细胞的迁移侵袭转移情况的一种简便快捷的实验方法，还可以构建两种细胞的共培养体系以及趋化性试验。今天咱们就来讲讲怎么做肿瘤细胞的侵袭转移实验。Transwell 侵袭实验，其实原理简单地说就是用一层膜将高营养的培养液和低营养的培养液隔开，细胞放在低营养的培养液里，为了找吃的，细胞会往高营养的培养液里面跑，但是有膜挡着，所以要穿过膜才行。我们在膜上涂上 ...

近年来关于组蛋白的研究越来越多，组蛋白各种各样的修饰有各种各样的功能，想要做跟组蛋白相关的研究，组蛋白提取是一个必不可少的技能了。你还在为组蛋白如何简单方便的提取而烦恼么，来，让学霸君教你一招。组蛋白有四种类型：H2A、H2B、H3、H4，组蛋白是染色体基本结构蛋白，因富含碱性氨基酸 Arg 和 Lys 而呈碱性，可与酸性的 DNA 紧密结合。因为组蛋白是偏碱性的，因此我们可以使用酸法来提取。下面学霸君就仔细介绍一下实验操作步骤啦：1、将 3- ...

CpG 作为作为表观调控的重要组成部分，在基因调控方面起着重要作用。CpG 岛是什么，CpG 岛主要位于基因的启动子（promotor）和第一外显子区域，约有 60% 以上基因的启动子含有 CpG 岛。CpG 岛的 GC 含量大于 50%，长度超过 200bp。接下来介绍几个网站：EMBOSS、MethPrimer、Sequence Manipulation Suite。这三个网站的网址在对话框回复【0521】即可查询复制。这三个网站操作起来大同小异，EMBOSS 刚进入界 ...

有不少人询问如何查询基因序列、如何进行引物设计、如何使用 BLAST 进行序列比对......其实这些问题在 NCBI 上都可以方便的找到答案。

FlowJo 是美国斯坦福大学 Leonard Herzenberg 实验室研发的一款流式数据分析软件，它可以对所有流式细胞仪产生的数据进行分析，在多种电脑操作系统上兼容性良好。由于功能强大，简单易用，已经被生命科学领域内的科学家、实验室广泛使用；同时 FlowJo 也是各高影响力核心期刊最受欢迎的流式数据分析软件。本文主要针对流式分析中常用的平均荧光强度 (MFI)，五个小步骤带你快速分析出 MFI。01打开 FloJo，显示工作台。02找到 ...

经常看到很多大牛的 PPT 里面有很多极具视觉性的 Animation，自己平时也看到很多生物医学相关的国外的 Video，但是以上两种大多只能在线观看，不能下载（若知道下载方法的请忽略此文），经过探索及使用，现将相关下载方法推荐给各位，希望对需要的人有用。01推荐的国外生物学视频网站1. BioInteractiveBioInteractive2. PBS Learning Media PBS LearningMedia以上两个网站都包含了大量 ...

一般情况下，瞬时转染是将 DNA 导入真核细胞的方式之一。在瞬时转染中，重组 DNA 导入感染性强的细胞系以获得目的基因暂时但高水平的表达。转染的 DNA 不必整合到宿主染色体，可在比稳定转染较短时间内（最多一周左右）收获转染的细胞，并对溶解产物中目的基因的表达进行检测。如果过表达基因用质粒，如果敲降用的是 siRNA(在 microRNA 实验中，过表达用的是 mimics，敲降用的是 inhibitor)。通过瞬时转染，将目的基因敲降或者过表达（gain ...

科研中的示意图总是给我们很严肃的感觉。但实际上，有些实验中的示意图往往为了达到生动的效果，会使用一些手绘风格的图片。比如下面这篇文章中的萌萌哒的小白鼠，顿时为这篇文章增色不少，给了读者更大的阅读兴趣。就要比这种风格的实验示意图看起来更加吸引读者吧；那么这种手绘风格的实验示意图是如何进行绘制的，下面我来详细介绍一下：工具：配置有 PPT 的电脑一台第一步：插入一个圆，一个椭圆，两者的直径与椭圆的短轴长度相同；然后将两者结 ...

今天，小编为大家介绍一款资料搜索神器，帮助我们搜索这么多年想要却搜不到的资料。《百度云搜索器》是一款目前国内最稳定最大的百度网盘资料搜索软件，由凌风独立开发完成。它是基于搜百度盘的数据源，以上亿级的大数据为依托，为广大用户提供最全面的资料搜索。可以从其官网 soft.sobaidupan.com 上免费下载。下载后不用安装，直接点击应用程序就可以运行，如下图所示：下面给大家介绍一下该软件的具体操作步骤：第一步：打开该软件， ...

信息量巨大的 Heatmap（热图）在 CNS 中受到热捧，正如名字一样越来越热了。无论你是各种组学的结果还是常见的数据，文章中不出现个热图你都不好意思叫 SCI 了！Heatmap 最大优点就是信息量大却一目了然。你会惊奇地发现，本来看似杂乱无章高高低低变化的数据做成热图后竟然一下子就简单了。传说是因为人眼可以选择性忽略一些噪音而抓住重点。听着挺有道理哈，可谁知道是不是真的呢；但文章里如果放个热图，顿时逼格确实提升了不少！我对这样的 ...