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        Tau 蛋白硫磺素T检测操作步骤

        相关实验:α突触核蛋白活体建模及其他活性测试

        最新修订时间:

        材料与仪器

        材料:硫黄素 T、PBS、蒸馏水、肝素、0.2μm 注射器过滤器、96 多孔孔板

        仪器:移液器、全波长荧光型酶标仪、震荡孵育器

        步骤

        1.在蒸馏水中制备 1mM 的硫黄素 T 储备液 (需是新鲜制备并用 2µm 注射式过滤器过滤)。

        2.然后用 PBS pH7.4 将每个孔中的硫黄素 T 储备液稀释至最终浓度为 25µM (每孔容量 = 100µL)。

        3.向每个孔中加入 10uM 肝素。

        4.将分装小份的 tau 蛋白在使用前于 37℃ 下进行解冻。

        5.将原纤维或单体 (或两者都有) 加入到合适的实验孔中. 用移液器上下吸放混合孔中物质。

        6.将孔板密封并放置于震荡孵育器上(800rpm),温度为 37℃。

        7.用全波长荧光型酶标仪读取荧光读数。

        8.再次将孔板密封放置于震荡孵育器上, 温度为 37°C。

        9.在 1 到 72 小时之间的固定间隔读数。

        注意事项

        酶标仪参数设置:

        温度: 37°C

        读取形式: 孔板扫描

        波长: 激发光 450nm,发射光 485nm

        PMT 增益: 自动

        闪光每读: 6

        震荡: 读数前 20 秒

        来源:丁香实验

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