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        α 突触核蛋白原子力显微镜(AFM)实验操作步骤(适用于 tau, Aβ 等其他活性蛋白)

        相关实验:α突触核蛋白活体建模及其他活性测试

        最新修订时间:

        材料与仪器

        材料:过滤消毒的 dH2O、新鲜切割的云母、0.1% 聚-L-赖氨酸、吸水纸、真空浓缩仪(Vacufuge)

        仪器:原子力显微镜

        步骤

        此方法描述了一般 AFM 样品制备和成像。具体参数可能因成像的蛋白质样本及其缓冲液成分而异。

        1. 1-5mg/mL 的蛋白质样品在过滤消毒的 dH2O 的中稀释 1/10 至 1/100 然后将 20uL 滴到新鲜切割的云母上(12mm,V1)。样品在室温下孵育 10-20 分钟。

        注:有些样品不容易粘在云母上;在这种情况下,用 0.1% 聚-L-赖氨酸预处理新鲜切割的云母,用过滤消毒的 dH2O 洗涤,并在添加样品前干燥。

        2.将 100uL 过滤消毒的 dH2O 添加到表面并使用干净的吸水纸吸走,以洗去盐分。总共重复 2-5 次。

        3.使用真空浓缩仪(Vacufuge)在室温下真空干燥云母上的洗涤样品 5-10 分钟,直到所有液体蒸发。

        4.然后在 AFM 仪器上使用 ACSTA 针尖在轻敲模式下对样品进行成像,自由振幅为 500mV,Z 控制器设定值为 55%。

        来源:丁香实验

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