等离子共振技术（SPR）检测蛋白质相互作用

表面等离子共振（SPR）是借助传统光学现象，利用光在不同介质中产生消逝波后与等离子波产生共振，进而可以构建生物分子相互作用的生物传感分析技术，实时跟踪在天然状态下生物分子间的相互作用，用以检测生物传感芯片上配位体与分析物之间的相互作用情况。

用于蛋白质组学研究、高通量筛选、肿瘤相关 DNA 标记以及实时跟踪在天然状态下生物分子（蛋白质与蛋白质）间的相互作用等。

一、样品稀释

1.配体蛋白用 PBS（ pH = 7.4）稀释。

2.分析物用 PBS（pH = 7.4）稀释。

二、实验流程

1. 按照 OpenSPRTM 仪器标准操作程序安装生物素（NTA）芯片。

2. 开始以最大流速（150 uL/min）运行，检测缓冲液为 PBS（PH 7.4）。

3. 达到信号基线后，调整缓冲液流速到 20 uL/min，上样 200 uL 的 IPA（异丙醇），运行 10 s 排气泡，达到基线后，缓冲液冲洗样本环，并用空气排空。

4. 上样 50 uL 链霉亲和素（加 150 uL 去离子水）注射进样品环。

5. 上样准备和注入 250 uL 生物素化的配体，配体用缓冲液稀释（浓度 10~100 ug/ml）

6. 上样样品流出流动池后，将泵的速率提高到 150 uL/min,冲洗系统 5 min，用注射器吸取运行缓冲液冲洗样品环。

7. 分析物用缓冲液稀释，并以 20 uL/min 上样，蛋白与配体结合时间均为 4~5 分钟；自然解离 6~7 分钟。

8. 使用分析软件 TraceDrawer （Ridgeview Instruments ab, Sweden）进行分析，分析方法是 One To One 分析模型第四部分 注意事项、常见问题等

1、缓冲液冲洗样品环后，在上分析物前，要观察基线 5 分钟，以确保稳定后再上样。

2、上样后，相互作用至少 5 min，确保配体信号达到稳定。