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        🔥 小鼠黑色素瘤皮下荷瘤模型

        相关实验:黑色素瘤皮下荷瘤模型构建

        别名:B16F10 黑色素瘤模型

        最新修订时间:

        丁香实验推荐阅读

        合作专家 | 林惠珍硕士

        基础医学免疫学 中山大学

        丁香实验推荐阅读

        审核专家 | 张乐宜博士

        临床医学 浙江大学

        简介

        B16F10 黑色素瘤皮下荷瘤模型操作简单,成本较低,可重复性强,实验周期相对较短,是研究黑色素瘤常用的动物模型。

        原理

        给小鼠皮下注射 B16F10 肿瘤细胞,肿瘤细胞迅速增殖生长,形成黑色素瘤。

        用途

        可用于研究目标基因、药物等在黑色素瘤发生发展过程中的作用。

        材料与仪器

        1. B16F10 肿瘤细胞;

        2. C57BL/6 小鼠;

        3. 试剂:PBS 缓冲液、胰蛋白酶溶液、75% 酒精消毒液;

        4. 器材:离心机、15 ml 离心管、1.5 ml EP管、显微镜、1.5 ml 注射器、小鼠剃毛器、消毒棉球、游标卡尺。

        步骤

        1. 使用胰蛋白酶溶液将处在对数生长期的 B16F10 肿瘤细胞消化成单个细胞悬液,转移至 15 ml 离心管中,调整离心机转速至 1600 rpm,离心 5 分钟,弃上清;

        2. 加入 5 ml PBS 缓冲液重悬细胞,进行洗涤,以 1600 rpm 转速离心 5 分钟,弃上清;

        3. 加入 1 ml PBS 缓冲液重悬细胞,使用显微镜进行细胞计数;

        4. 按照计数结果加入 PBS 缓冲液,调整细胞浓度为 5×106/ml,将细胞转移至 1.5 ml EP 管中;

        5. 接种时小鼠体重控制在 18~22 g 左右。用小鼠剃毛器剔除小鼠右下方背部毛发,暴露皮肤,用 75% 酒精消毒液进行消毒;

        6. 再次吹打、混匀细胞悬液。用 1.5 ml 注射器吸取细胞悬液,注射器针头斜面朝上进针入小鼠皮下,缓慢注入 100 ul 细胞悬液,使得每只小鼠接种 5×105 个细胞,随后旋转针头出针,用消毒棉球按压注射部位 1~2 分钟;

        7. 注射后密切关注肿瘤生长情况,大约在第 7 天可见荷瘤部位有黑色硬块,即造模成功;

        8. 每隔 1~3 天使用游标卡尺测量肿瘤体积,记录肿瘤最长径(a)和最短径(b),肿瘤体积计算方法:V = a × b × 0.5 × b (mm3)。

        注意事项

        1. 在注射 B16F10 细胞之前,要用 PBS 缓冲液洗涤细胞 1~2 次,避免细胞培养基中的血清等成分在小鼠体内引起排斥反应,影响肿瘤在小鼠体内生长;

        2. 注射完成后应旋转出针、用消毒棉球按压注射部位 1~2 分钟,避免细胞悬液渗出;

        3. B16F10 黑色素瘤在小鼠皮下生长速度较快,要注意控制实验周期,避免因为实验周期太长导致肿瘤生长过大,超出动物伦理允许范围。

        常见问题

        1. 不同小鼠肿瘤生长速度差异大:可能是因为注射器吸取细胞悬液前没有充分混匀细胞悬液,导致每只小鼠实际注射的细胞数量不一致;

        2. 第 7 天没有看到黑色素瘤硬块:由于每个实验室细胞来源不同、状态不同,可能生长特性会有差异,因此可以调整注射的细胞数目或延长观察时间;

        3. 分离肿瘤发现肿瘤内部呈黑色液体状:B16F10 黑色素瘤质地较柔软,切开后有大量黑色糊状组织是正常现象。

        来源:丁香实验

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