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        发光检测实验

        相关实验:动物活体光学成像

        最新修订时间:

        简介

        实验应用:

        1.水质毒素检测;

        2.基于水母素的 Ca2+ 浓度测定;

        3.ATP 发光检测;

        4.快速筛选阳性细胞或阳性克隆;

        5.绘制标记物的发光梯度或曲线;

        6.细胞生物发光效率测试。

        材料与仪器

        管式发光检测仪或板式发光检测仪(灵敏度:≤10amol ATP或≤20zmol 荧光素酶),离心机

        步骤

        1、取出待检测细胞,弃培养基,加入 PBS 缓冲液(无菌),清洗 2-3 次;

        2、加入适量胰酶消化细胞(10cm 皿加入 1mL 胰酶;6cm 皿加入 0.5mL 胰酶)。若悬浮细胞,则无需胰酶消化,可直接从第 5 步开始;

        3、显微镜下观察细胞明显收缩,或用移液枪吹打,细胞刚好可以被吹打下来,即消化完成;

        4、加入 1-2 倍体积含血清的培养基,终止消化;

        5、用移液枪吹散细胞,把细胞悬液转移到 15mL 离心管中;

        6、1000rpm 离心 3min;

        7、弃上清,加入 1mL 含血清的培养基,重悬细胞;

        8、吸取适量细胞悬液,加入到无菌 5mL 离心管或 96 孔板;

        9、放入管式发光检测仪或板式发光检测仪中检测。

        10、再加入 15-0.3 mg/mL D-荧光素,混匀,放入管式发光检测仪或板式发光检测仪中检测;

        11、结果分析,若数值大于加入底物前测量值,则为阳性。

        来源:丁香实验

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