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        希尔反应的观察与测定

        相关实验:希尔反应的观察与测定

        最新修订时间:

        简介

        希尔反应(Hill reaction)是绿色植物的离体叶绿体在光下分解水,放出氧气,同时还原电子受体的反应,是光合作用反应中的重要现象。本实验的目的是通过希尔反应的观察与测定,了解光合作用在叶绿体中进行的光还原作用。

        原理

        希尔反应是指离体叶绿体悬液,在光下释放氧气,同时还原所加入的氧化剂或电子受体(高铁盐)的过程。

        希尔反应的观察与测定

        氧化剂2,6-二氯酚靛酚是一种蓝色染料,接受希尔反应的电子和H+ 后被还原成无色,可以直接观察颜色的变化,也可用分光光度计对还原量进行精确测定,测定反应前后染料吸光度 A 的变化,反应变化在 4~5 min 内呈线性关系。

        希尔反应的观察与测定

        材料与仪器

        材料:叶绿体悬液。

        试剂:

        ① 0.3 mmol・L-1 2,6-二氯酚吲哚酚钠(称取 8.7 mg 二氯酚吲哚酚钠,加蒸馏水定容至 100 mL);

        ② 0.1 mol・L-1 磷酸缓冲液(pH7.3);

        ③ 石英砂。

        器材:

        ① 试管
        ② 试管架
        ③ 水浴锅
        ④ 移液管。

        步骤

        希尔反应的观察与测定的基本过程可分为如下几步:

        1. 加样:取干净试管 6 支,分为两组,并分别编成 1、2、3 号,然后按表 12-1 加入试剂。

        表 12-1 希尔反应测定配制表

        类别

        管号

        0,1 mol・L-1 磷酸

        叶绿体悬液

        煮沸

        0.3 mmol・L-1

        缓冲液/mL(pH 7.3)

        /mL

        /min

        二氯酚吲哚酚钠/mL

        完整叶绿体

        1

        9.4

        0.1

        -

        0.5

        2

        9.4

        0.1

        5

        0.5

        3

        9.9

        0.1

        -

        -

        破碎叶绿体

        1

        9.4

        0.1

        -

        0.5

        2

        9.4

        0.1

        5

        0.5

        3

        9.9

        0.1

        -

        -

        注:(1)叶绿体悬液为前一实验制备。

        (2)2 号管加叶绿体悬液后于沸水浴上煮 5 min,然后用蒸馏水补足蒸发的水分。

        (3)3 号管为调零点的对照。

        (4)各试管都在最后加二氮酚呼噪酚钠,且加入后立即摇匀比色,以代表作用时间为 0。各管在加染料之前保存在冰浴中。

        2. 比色:当加入染料后立即摇匀倒入相应的比色杯中,迅速测定吸光度,波长为 620 nm,此即代表 0 min 时的吸光度。然后将比色杯置于离 150 W 灯光约 60 cm 处照光,每隔 1 min 快速读下吸光度的变化,连续进行五六次读数,严格控制照光时间。

        3. 将结果以每分钟 ∆620 的变化量(∆A620・min-1)为纵坐标,以时间(min)为横坐标作图。

        注意事项

        1. 加叶绿体悬液在沸水浴上煮的时候,需用蒸馆水补足蒸发的水分。

        2. 加入染料后要立即摇匀并迅速测定吸光度。

        3. 配制 0.3 mmol・L-1 2,6-二氯酚叫噪酚钠时,如药品纯度低,可适当提髙浓度。

        来源:丁香实验

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