简单定性中和试验

中和试验（neutralization test）是在体外适当条件下孵育病毒与特异性抗体的混合物，使病毒与抗体相互反应，再将混合物接种到敏感的宿主体内，然后测定残存病毒感染力的一种方法。凡是能与病毒结合，并使其失去感染力的抗体称为中和抗体，因为病毒要依赖于活的宿主系统复制增殖，因此，中和试验必须在敏感的动物体内（包括鸡胚）和培养细胞中进行。
简单定性中和试验主要用于检出样本中的病毒，亦可进行初步鉴定或定型，如用于毒素（如肉毒毒素）的鉴定和分型。

中和试验的基本原理是特异性的抗病毒抗体（中和抗体）与病毒结合之后，使病毒失去吸附、穿入宿主细胞的能力，从而阻止了病毒在宿主细胞内的复制和病毒感染机体的过程。进行中和试验时，首先将病毒与抗体在适当的条件下混合、孵育后，接种给敏感宿主，然后观察病毒感染敏感宿主的情况，即观察残存的病毒对宿主的感染力。用敏感动物进行中和试验时，主要观察抗体能否保护易感动物免于死亡、瘫痪；用细胞培养法进行中和试验时，主要观察抗体能抑制病毒的细胞病变效应（cytopathic effect，CPE）或病毒空斑形成（virusplaque formation）等；用鸡胚接种法进行中和试验时，主要通过观察绒毛尿囊膜上的痘疮结构来检测病毒，或用血凝试验检测鸡胚尿囊液流感病毒的滴度。

简单定性中和试验的基本过程可分为如下几步：

1. 根据病毒易感性选定试验动物（或鸡胚、细胞培养）及接种途径。

2. 将病料（含病毒的样本材料）研磨，并稀释成一定浓度（100～1000LDso 或 TCIDs0）。污染的病料需加抗生素（青霉素、链霉素各 200～1000 单位），或用细菌滤器过滤，与已知的抗血清（适当稀释或不稀释）等量混合，并用正常血清加稀释病料作对照。

3. 混合后置 37 ℃ 1 小时，分别接种实验动物，每组至少 3 只，分别隔离饲喂，观察发病和死亡情况。

4. 对照动物死亡，而中和组动物不死，即证实该病料中含有与该抗血清相应的病毒。

1）病毒悬液：低温保存，多次分装，避免反复冻存。

（2）抗血清：常需要在 56 ℃ 灭活 30 分钟，避免一些非特异性物质增强抗体中和作用，和灭活病毒。

（3）孵育温度和时间：37 ℃ 1 小时。