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        加速型抗GBM肾炎动物模型

        相关实验:抗肾小球基底膜肾炎动物模型

        别名:animal models of accelerative anti-glomerular basement membrane nephropathy

        最新修订时间:

        简介

        该模型目前使用的较多,常用的是大鼠加速型抗基底膜(CBM)肾炎模型。

        原理

        采用异体抗肾小球基底膜(CBM)抗体直接注射,诱发肾炎。

        用途

        用于需要较少抗血清的抗基底膜肾炎的实验研究。

        材料与仪器

        实验对象:


        ① SD 大鼠;


        ② 新西兰白兔。


        实验器材:


        ① 超声粉碎机。


        实验试剂:

        ① 磷酸盐缓冲液(PBS);

        ② 弗氏完全佐剂。

        步骤

        加速型抗GBM肾炎动物模型的基本过程可分为如下几步:

        A. 以梯度筛网法获取 SD 大鼠肾小球,经超声粉碎,离心,得到富含 GBM 的沉积物,磷酸盐缓冲液(PBS)调成 10 mg/mL。

        B. 取 1 mL GBM 加等量弗氏完全佐剂充分乳化后,于新西兰白兔(2.5 kg)背部多点皮下注射,每两周一次,共 10 次,间接免疫荧光法测定其血清效价在 1:64 以上,含兔 IgG 12~16 g/L,最后一次免疫后第 10天 颈动脉放血取血清,56 ℃,30 分钟灭活补体。

        C. 取 SD 大鼠 12 只,体重 150~200 g,将 1 mL(含 1 mg)正常兔 IgG 与等量弗氏完全佐剂充分乳化后,于大鼠背部皮下多点注射进行预免疫,6 天后尾静脉注射兔抗鼠 GBM 血清(1 mL/100 g),置代谢笼留尿,1 天后开始测尿蛋白量,以 24 小时尿蛋白量 > 100 mg/100 g 为模型制作成功。

        一般在注射抗血清后 1 天即出现蛋白尿。第 3 天达高峰。1 周后尿蛋白量逐渐减少,1 个月内基本恢复正常。

        注意事项:

        在大量蛋白尿期间可伴有血肌酐浓度增高,肾脏免疫病理检查可见大量 IgG 沿 GBM 呈连续线状沉积,普通光镜检查可见肾小球有中性粒细胞浸润,系膜区增宽,系膜细胞和内皮细胞增生,基底膜增厚,肾间质可有炎症细胞浸润和纤维化。

        注意事项

        成功率较高、成膜时间较短,但抗血清少。

        来源:丁香实验

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