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        转基因致 Graves 病动物模型

        相关实验:Graves 病动物模型

        最新修订时间:

        简介

        转基因致 Graves 病动物模型,是用转基因方法建立永久的 Graves 病动物模型,在以上谈及的各种方法中,虽然实验小鼠出现不同程度的甲亢表现,但这种免疫应答是暂时性的.所产生的 TSAb 都是针对外来 TSHR。为了克服上述问题.转基因方法被用于建立 Graves 病动物模型 。

        原理

        转基因致 Graves 病动物模型的基本原理是用转基因方法建立永久的 Graves 病动物模型。

        用途

        转基因致 Graves 病动物模型可用于普遍意义上的 Graves 病的研究。

        材料与仪器

        器材:


        病毒转染、提 RNA、逆转录、PCR、显微注射相关器材。


        试剂:


        ①GD 患者的外周血 ;


        ②EB 病毒;


        ③PCR 扩增相关试剂 等。

        步骤

        转基因致 Graves 病动物模型的基本过程可分为如下几步:


        A. 从 GD 患者的外周血中提取表达 TSAb 细胞克隆 B687, EB 病毒转染 B 细胞,使其永生化后,从中分离出 TSAb 重链 (H) 和轻链 (L) 可变区 (V) 的 cDNA 。


        B. 经过 PCR 扩增,依次连接 5.7 kB 的轻链、 3.7kB5' 非编码区的 VDJ 片段和 4.7 kB 的重链。 在此片段上游 500 bp 处加入 ATG 启动密码子,同时还包括一些增强子及附件。


        C.14 .1 kB 的片段微注射入 C57BU6J 小鼠的受精卵中,观测时间设定在小鼠出生后 12-20 周。


        结果如下:与对照组不同,转基因组小鼠血清 FT4 升高、 TSH 水平下降,伴有基础体温升高、体重下降,吸碘率升高和甲状腺组织增生表现; ELISA 法检测血清 lgM 升高,与 FT4 水平正相关。

        来源:丁香实验

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