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        小鼠气道哮喘模型炎症分析实验

        相关实验:小鼠气道哮喘模型的建立及分析实验

        最新修订时间:

        简介

        小鼠雾化刺激两天之后在小鼠气管部位进行插管,用 0.8 ml 的 PBS 对肺部灌洗 3 次,灌洗液可以用于气道炎症因子的分析。

        材料与仪器

        器材:

        静脉留置针、小鼠。

        试剂:

        ① 三溴乙醇(avertin);
        ② PBS。

        步骤

        小鼠气道哮喘模型炎症分析实验的基本过程可分为如下几步:

        A 取成年小鼠,以 240 mg/kg 的用量腹腔注射三溴乙醇(avertin)进行麻醉。

        B 使用 0.9 mm 直径的静脉留置针(Smiths Medical International Ltd.)进行气管插管。

        C 用 1 ml 冰冷的 PBS 对小鼠肺部进行灌洗,来回轻轻抽吸 3 次,取出 700~800 μl 液体,放置在冰上。

        D 重复上述步骤两次,每次吸出的液体分别装在 EP 管中。

        E 2000 g 离心 6 分钟,将第一管灌洗液(BALF)的上清分装,并马上冻存在-80℃ 冰箱中,可用于 ELISA 检测细胞因子含量。

        F 三管细胞沉淀用 500μl PBS 重悬,根据实际情况稀释,用血细胞计数板进行细胞计数。

        G 取适当体积的细胞悬液制作细胞涂片,自然晾干后可用甲醇固定,并用 Wright-Giemsa 染色,染色后的涂片可用于免疫细胞分类计数。

        注意事项

        支气管肺泡灌洗液细胞通过 Diff-Quick(Baxter-Dale,Dudingen,Germany)染色方法进行分类计数。每一张片子上至少数 200 个细胞。剩余的支气管肺泡灌洗液用来做相关炎症因子的分析。通过酶联免疫吸附法对支气管肺泡灌洗液中的 IL-4,IL-6,IL-13 进行测定。图 8-4-4 是 MLCK 基因敲除小鼠诱导的哮喘模型的炎症分析结果。小鼠气道哮喘模型炎症分析实验

        来源:丁香实验

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