简介
B 淋巴细胞的分离是利用 B 细胞多种生物学特性，如 B 细胞表达 CD19、CD20 分子，具有膜免疫球蛋白等，可将 B 细胞与其他细胞进行分离。
原理
流式细胞术分选 B 淋巴细胞的基本原理是通过直接或间接荧光标记法标记 B 细胞，应用流式细胞仪分选 B 细胞。
材料与仪器
试剂：
① 连接有荧光素的抗小鼠或人 CD19 的单克隆抗体
② 含 10％ FCS 的 RPMI 1640 培养液
③ 分选缓冲液（含 0.5％ BSA 的无菌 PBS 液）
仪器：
15 ml 无菌离心管、流式细胞分选仪
步骤
流式细胞术分选 B 淋巴细胞的基本过程可分为以下几步：
（1）制备细胞悬液
① 分离人外周血 PBMC，用 4 ℃ 预冷的分选缓冲液洗涤细胞 2 次，重悬细胞浓度为 100x10/500 μl；
② 分离小鼠脾脏单个核细胞，取 2～3 只小鼠的脾脏制备单个核细胞，去除红细胞后用 4 ℃ 预冷的分选缓冲液洗涤细胞 2 次，重悬细胞浓度为 100x106/500 μl。
（2）荧光抗体标记 B 细胞
加适量连接有荧光素的抗小鼠/人 CD19 的单克隆抗体，混匀后 4 ℃ 避光 30 分钟。
（3）流式细胞仪分选 B 细胞群
孵育抗体结束后，用分选缓冲液洗涤细胞 2 次，再用 500 μl 含 0.5％ BSA 的无菌 PBS 液重悬细胞，调试流式细胞仪，设门于 B 细胞群，进行流式分选。
注意事项
（1）实验过程保证无菌操作，所用缓冲液均需要提前 4 ℃ 预冷，并采用 4 ℃ 离心。
（2）流式细胞仪分选细胞的量有一定的限制，一次分选的最大合理量约为 108 个细胞。分选细胞数量过多，操作时间过长将影响细胞活性。
来源：丁香实验
