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        表皮细胞的培养实验(表皮细胞的培养实验)

        相关实验:表皮细胞的培养实验

        最新修订时间:

        简介

        表皮细胞的培养实验是指在体外条件下表皮细胞的培养。

        原理

        表皮细胞的培养实验的基本原理是用特定的消化酶处理皮肤组织块,其表皮可在基膜处与真皮发生分离,当表皮被消化成细胞团或单细胞后,用适当的培养液加以培养,表皮细胞即可发生大量的增殖。

        材料与仪器

        器材:

        ① 新生 1~2 d 的小鼠
        ② 培养瓶
        ③ 吸管
        ④ 胶帽
        ⑤ 培养皿
        ⑥ 眼科剪
        ⑦ 眼科镊
        ⑧ 离心机
        ⑨ 倒置显微镜
        ⑩ 超净工作台
        ⑪ CO2 培养箱等
        ⑫ 胶帽
        试剂:
        ① D-Hanks 液
        ② DMEM 培养基(含 10% 胎牛血清)
        ③ 0.25% 胰蛋白酶液

        步骤

        表皮细胞的培养实验基本过程可分为以下几步:
        (1)取材
        A. 取新生 1~2 d 的小鼠背部皮肤一块,去除皮肤下的脂肪组织。
        B. D-Hanks 液清洗皮肤块 3 遍,用眼科剪将皮肤剪成 0.5 x 1.0 c㎡小块,置于 0.25% 胰酶中。
        (2)消化及接种
        A. 于 4 ℃ 消化 24 h 或 37 ℃ 消化 2~3 h。
        B. 用眼科镊将表皮与真皮仔细分离。
        C. 将分离出的表皮置于离心管中,加入含 10% 胎牛血清的 DMEM 培养液,吹打表皮,制备细胞悬液。
        D. 2000r/min 离心 10 min,弃上清。
        E. 加入含 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基,混匀后,按 1 x 106 个/ml 细胞密度接种于 25 ml 培养瓶中。
        F. 37 ℃ 培养 4 h,轻轻吸去培养上清,加入新鲜的培养基继续培养。
        G. 2 d 后,于倒置相差显微镜下观察细胞并照相。
        H. 弃去原培养基,加入新鲜培养基,继续培养 3 d、7 d,于倒置相差显微镜下观察细胞并照相。

        注意事项

        1. 取材后,皮肤下的脂肪组织一定要清除干净,否则残留的脂肪组织会影响酶消化效果。
        2. 消化前,用眼科剪剪皮肤时,应控制皮肤块的大小。若皮肤块太大,胰蛋白酶对皮肤的作用将不完全;若皮肤块太小,在胰酶作用后分离表皮与真皮的过程不易操作。
        3. 对胰蛋白酶消化的表皮进行吹打,使其分散为单细胞或细胞团时,常有部分残存表皮不易被吹打分散,组成这些表皮的细胞主要来自角质层,其细胞的分化程度高、彼此间连接紧密,细胞一般无增殖能力,因此,可不必对这些表皮进行继续吹打。
        4. 表皮细胞的体外培养中,基底层细胞是主要增殖的细胞,其数量在表皮细胞总量中仅占较小部分,因此,为提高培养细胞的存活率,应适当地增大接种细胞数量。

        来源:丁香实验

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