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        琥珀酸脱氢酶染色技术

        相关实验:组织学基本技术

        别名:succinic dehydrogenase (SDH) stain

        最新修订时间:

        简介

        琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase)是线粒体的一种标志酶,其作用是从底物将氢传递给受氢体的酶系。

        原理

        琥珀酸脱氢酶染色技术的基本原理是琥珀酸脱氢酶(succinic dehydrogenase)是线粒体的一种标志酶,其作用是从底物将氢传递给受氢体的酶系,经氢传递系统使受氢体还原显色,从而达到染色定位的目的。

        材料与仪器

        器材:10 ml 染缸、冰冻切片。

        试剂:

        ① 福尔马林钙(FCa)

        ② 80% 乙醇


        ③ 0.1 mol/L 磷酸缓冲液(a.磷酸氢二钠 3.58 g,加水 100 ml;b.磷酸二氢钠 1.56 g,加水 100 ml。将 a 加入 b 中即成)


        ④ 0.1 mol/L 琥珀酸钠


        ⑤ 氯化硝基四氮唑蓝(NBT)

        ⑥ 二甲基亚砜(DMSO)

        ⑦ 丙二酸钠

        ⑧ 蒸馏水

        ⑨ 生理盐水

        ⑩ 甘油或甘油明胶封片

        ⑪ 作用液(0.1 mol/L 磷酸缓冲液(pH 值 7.6)2.5 ml,0.1 mol/L 琥珀酸钠 2.5 ml,NBT / DMSO 5 mg / 2.5 ml,混合)

        步骤

        琥珀酸脱氢酶染色技术的基本过程可分为如下几步:

        A. 切片进入作用液 15~35 min(室温)。

        B. 生理盐水洗。

        C. FCa 固定 10 min。

        D. 80% 乙醇 5 min。

        E. 蒸馏水洗。

        F. 甘油明胶封片。

        注意事项:对照片制作:在作用液中加入丙二酸钠(3.7 mg/ml)。

        注意事项

        1. NBT/DMSO 5 mg/2.5 ml 应现用现配

        来源:丁香实验

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