• 我要登录|
  • 免费注册
    |
  • 我的丁香通
    • 企业机构:
    • 成为企业机构
    • 个人用户:
    • 个人中心
  • 移动端
    移动端
丁香通 logo丁香实验_LOGO
搜实验

    大家都在搜

      大家都在搜

        0 人通过求购买到了急需的产品
        免费发布求购
        发布求购
        点赞
        收藏
        wx-share
        分享

        碱性磷酸酶染色技术

        相关实验:组织学基本技术

        别名:alkaline phosphatase,ALP 钙-钴法

        最新修订时间:

        简介

        碱性磷酸酶染色技术是基于碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)与钙化作用密切相关。

        原理

        碱性磷酸酶染色技术的基本原理是碱性磷酸酶(alkaline phosphatase)与钙化作用密切相关,因此,以β甘油磷酸钠为底物,在酶的作用下,产生磷酸离子与钙离子形成磷酸钙为第一反应产物。经硝酸铅处理变为磷酸铅沉淀,为第二反应产物。两种反应产物均易解离,进一步用稀释的硫化铵处理,形成稳定的硫化铅颗粒,沉淀于微血管内皮中,定位于酶活性所在之处,光镜下呈黑色。

        材料与仪器

        器材:10 ml 染缸、恒温水浴箱、冰冻切片(或石蜡切片)。

        试剂:

        ① 福尔马林钙固定液

        ② 巴比妥钠

        ③ β-甘油磷酸钠

        ④ 无水氯化钙

        ⑤ 硫酸镁

        ⑥ 双蒸水

        ⑦ 蒸馏水


        ⑧ 2% 硝酸钴

        ⑨ 1% 硫化铵

        ⑩ 甘油或甘油明胶封片

        ⑪ 作用液(① 2% 巴比妥钠 2.5 ml;② 3% β-甘油磷酸钠 2.5 ml;③ 2% 无水氯化钙 5 ml;④ 5% 硫酸镁 0.25 ml;⑤ 双蒸水 1.25 ml。混合后 pH 为 9.4 左右,37 ℃ 预温 10~15 min。)


        步骤

        碱性磷酸酶染色技术的基本过程可分为如下几步:

        A. 冰冻切片经福尔马林钙(FCa)固定 15 min。

        B. 蒸馏水洗。

        C. 进入作用液 10 min(37 ℃)。


        D. 蒸馏水洗。


        E. 2% 硝酸钴 5 min。

        F. 蒸馏水洗。

        G. 1% 硫化铵 1~2 min(显棕黑色)。

        H. 蒸馏水洗。

        I. 甘油明胶封片。

        注意事项:(对照片制作:免去底物,以蒸馏水代替 3% β-甘油磷酸钠。进入作用液前先经过 90 ℃ 蒸馏水 10 min,再入作用液。)

        注意事项

        1. 石蜡切片作酶反应可不脱蜡进作用液,也可先脱蜡至水再进作用液(推荐)。


        2. 作用液现用现配,保证 pH 值、浓度是关键。

        来源:丁香实验

        ad image
        提问
        扫一扫
        丁香实验小程序二维码
        实验小助手
        丁香实验公众号二维码
        扫码领资料
        反馈
        TOP
        打开小程序