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        CFSE 染色法检测细胞增殖

        相关实验:细胞增殖检测实验

        最新修订时间:

        简介

        荧光染料 CFSE,也称 CFDA SE(5,6-carboxyflu- orescein diacetate,succinimidyl ester)即羟基荧光素二醋酸盐琥珀酰亚胺脂,是一种可穿透细胞膜的荧光染料。

        材料与仪器

        仪器:流式细胞仪或荧光显微镜、离心机。

        试剂:CFSE 试剂盒;灭菌纯水;细胞培养基;移液枪;枪头;15 ml 离心管。

        步骤

        1、根据试剂盒说明配制 CFDA SE 储存液和细胞标记液。

        2、细胞正常培养及药物等处理后,收集细胞至 15 ml 离心管,用 1 ml CFDA SE 细胞标记液重悬细胞。

        3、加入相应比例的 CFDA SE 储存液,轻轻混匀。

        4、37 度孵育 10 分钟。

        5、立即加入约 10 ml 细胞培养基,室温下轻轻颠倒混匀。

        6、离心,去除上清液,加入 5 ml 细胞培养基洗涤一次。

        7、离心后去上清,加入 5 ml 细胞培养基,37 度孵育 5 分钟。

        8、再次离心,去上清。

        9、加入细胞培养基重悬细胞,进行正常细胞的培养或处理等操作,后续可在荧光显微镜下直接观察细胞标记数目以反应细胞增殖情况,或用流式细胞仪检测细胞增殖情况。

        注意事项

        1、CFDA SE 的荧光近似于 FITC,外标抗体的荧光不能与之重叠。

        2、试剂现用现配,如一次性配制,需注意使用时限。

        3、荧光染料存在淬灭问题,实验操作尽量注意避光。

        4、试剂盒内试剂若由沉淀,则需融解后再使用。

        来源:丁香实验

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