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        电泳染色分析测定细胞可溶性蛋白质含量

        相关实验:细胞可溶性蛋白质的含量测定实验

        最新修订时间:

        简介

        蛋白质的电泳染色分析是用电泳技术将混合液中不同的蛋白质分离开,通过蛋白质染色明确某种蛋白质的相对含量的技术。电泳分离血浆蛋白,染色并计算清蛋白和球蛋白的比例是此法的最早应用。


        原理

        电泳染色分析测定细胞可溶性蛋白质含量的基本原理是电泳技术将混合液中不同的蛋白质分离开,通过蛋白质染色明确某种蛋白质的相对含量得到这种蛋白质在总蛋白中所占比例。蛋白质染色方法包括考马斯亮蓝 R-250 染色法、银染色法(silver staining)、氨基黑 10B 染色法和丽春红 S(ponceau S)染色法等。其中前两种方法主要用在电泳胶的染色,后几种方法主要用在固定于硝酸纤维素膜或其他蛋白转移膜上的蛋白质染色。






        材料与仪器

        器材:离心机、电泳仪、薄层扫描仪
        试剂:
        ①SDS-PAGE 上样缓冲液
        0.25% 考马斯亮蓝 R-250 染色液


        步骤

        电泳染色分析测定细胞可溶性蛋白质含量基本过程可分为如下几步,本方法以大肠埃希菌表达人肿瘤坏死因子 TNF-α 为例说明其基本操作。

        A. 100μl 诱导表达后的细菌培养液,离心去上清,用 PBS 洗涤一次

        B. 在菌体沉淀中加入 SDS-PAGE 上样缓冲液50μl,振荡使菌体完全悬浮,95℃ 加热 3 分钟

        C. 离心,将 25μl 上清加到 SDS-PAGE 胶的样品槽中进行电泳分离

        D. 电泳后用 0.25% 考马斯亮蓝 R-250 染色液染色 2~4 小时后脱色

        E. 最后在薄层扫描仪上扫描并计算出目的蛋白在总蛋白中所占的百分比(图10-6)

        电泳染色分析测定细胞可溶性蛋白质含量

        来源:丁香实验

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