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        方案一

        最新修订时间:

        原理

        单级质谱测序是分析肽段的阶梯序列,即相邻肽段间相差一个氨基酸残基,用质谱分析肽阶梯,通常用 MALDI-TOF,MS 分析。 MS/MS 测序用的是上文所述用于数据库检索的 CID 谱,但碎片离子由人工完全解析。


        用于MS 序列分析的肽阶梯是由化学或酶法降解肽段产生,由 C 未端或N未端断裂。测定N末端序列的化学方法应用Edman化学反应,用MS或 MS/MS 读出产生的变短的肽。这一方法通常被称为“阶梯测序'。在这种方法上发展了两种变化方式。

        材料与仪器

        实验材料
        仪器、耗材

        步骤

        第一种方法是任每一测序循环开始时,在多肽/蛋白质底物内加 Edman 试剂,每一个循环中有一小部分的底物袚 N 末端封闭,末端封闭后的肽在下一个循环中不会参加反应,这祥就产生了序列阶梯,最终反应产物混合物经 MALDI-MS 分析,其质量数之差反映了氨基酸残基的质量数。

        常见问题


        来源:丁香实验

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