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        基本方案

        相关实验:尼氏染色实验

        最新修订时间:

        原理

        尼氏染色法(Nissl Staining)是用碱性染料染神经组织的一种方法。尼氏体是胞质内的一种嗜碱性物质,广泛见于各种神经元,不同神经元中的尼氏体形状、大小和数量则各有差异。用于尼氏染色的碱性染料主要有焦油紫、亚甲蓝、甲苯胺蓝和硫堇等。我室主要用焦油紫和硫堇染色。尼氏染色法可以染出尼氏体,用来观察神经元内的细胞结构;还可以通过尼氏染色后对尼氏体的观察来了解神经元的损伤情况

        材料与仪器

        实验材料
        试剂、试剂盒

        步骤

        (1)石蜡或冰冻切片依次经二甲苯、无水乙醇、95%酒精、80%酒精、70%酒精和蒸馏水,各自时间可以参考HE染色。


        (2)1%焦油紫或1%硫堇染色10min至1h。


        (3)蒸馏水清洗。


        (4)70%酒精分色数秒至数分钟。


        (5)依次经70%酒精、80%酒精、95%酒精,各2min脱水。


        (6)无水乙醇2次,每次5min。二甲苯2次,每次10min。


        (7)DPX封片。尼氏体呈紫色、细胞核呈淡紫色

        注意事项

        (1)切片若为石蜡切片,要在二甲苯中先脱蜡。


        (2)焦油紫或硫堇的染色时间也是根据染液配制时间的新旧、切片厚度和环境温度灵活掌握。


        试剂准备:


        (1)焦油紫溶液1g焦油紫溶于100ml蒸馏水,溶解后过滤待用。


        (2)硫堇溶液1g硫堇溶于100ml蒸馏水,溶解后过滤待用。

        常见问题

        (1)应该在显微镜下观察分色程度,使尼氏小体呈深色而背底基本无色为最佳。如分色不够,可以退回酒精再次分色。如分色过度,也可退回再染。


        (2)尼氏染色应充分脱水,否则容易褪色。


        (3)HE染色方法虽然也能观察到胞质中嗜碱性颗粒,但结构不甚清晰,神经元的轴突、树突难以辨认。在尼氏染色中尼氏体清晰可辨,而且很容易区分轴突和树突。尼氏染色中尼氏体受染后呈块状(形如虎斑)或颗粒状,核周围尼氏体颗粒较大,近边缘处较小而细长,如在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映神经细胞合成蛋白质的功能较强,在神经元受损时,尼氏体的数量可减少甚至消失,实验者可以根据实验目的选择HE染色和尼氏染色。

        来源:丁香实验

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