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        光度计测定法

        相关实验:脲酶的测定实验

        最新修订时间:

        原理

        光度计测定法

        材料与仪器

        步骤

        实验所需「试剂」具体见「其他」


        0.98 ml 实验混合物

        光度计测定法


        0.02 ml 脲酶


        25℃、340 nm 处吸收值降低,ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。

        常见问题

        试剂:


        0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6


        2.0 mol/L 脲(Mr=60.0;12 g 溶于 100 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)


        25 mmol/L ADP(二钠盐,Mr=471.2;118 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)


        10 mmol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH7.6)


        0.1 mol/L α-酮戊二酸(单钠盐,Mr=168.1;168 mg 溶于 10 ml 0.1 mol/L 磷酸钾,pH 7.6)来源于牛肝脏的谷氨酸脱氢酶(GluDH,500 U/ml 在 0.1 mol/L 磷酸钾中,pH 7.6)


        脲酶(大约 1 mg/ml,使用前用 0.1 mol/L 磷酸钾、pH 7.6 溶液稀释至约 0.1 U/ml)

        来源:丁香实验

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