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        与 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)偶联的还原反应

        最新修订时间:

        原理

        与 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)偶联的还原反应


        材料与仪器

        步骤

        实验所需「试剂」具体见「其他」


        0.98 ml 实验混合物
        与 3-磷酸甘油酸激酶(PGK)偶联的还原反应


        0.02 ml 酶溶液


        25℃ 时,于 340 nm 处吸收值降低。NADPH 的吸收系数 ε340=6.3×103 l/(mol·cm)。


        注意事项


        常见问题

        试剂:


        0.1 mol/L 三乙醇胺-NaOH pH 7.6(三乙醇胺-HCl,Mr=185.7;溶解 18.6 g 于 800 ml H2O 中,用 1 mol/L NaOH 调节至 pH 7.6,补充到 1 L)


        0.1 mol/L 3-磷酸甘油酸(3-磷酸甘油酸,二氢盐,Mr=230.0;230 mg 溶于 10 ml 水中)


        0.1 mol/L ATP(二钠盐,三水合物,Mr=605.2;605 mg 溶于 10 ml 水中)


        0.01 mol/L NADH(二钠盐,Mr=709.4;71 mg 溶于 10 ml 水中)


        0.1 mol/L EDTA(Mr=292.2;292 mg 溶于 10 ml 水中)


        0.1 mol/L 硫酸镁(MgSO4 · 7H2O,Mr=246.5;247 mg 溶于 10 ml 水中)


        3-磷酸甘油酸激酶,从酵母中提取(约 2000 U/mg)

        来源:丁香实验

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