原理
病毒研究中用磷钨酸染色后发现在黑色背景中病毒粒子如同一个亮晶晶的「空洞」。尔后用磷钨酸对飞噬菌体染色也见到同样的现象，即将这种现象称为「负染色」。负染色是一种反衬染色，即高密度物质如重金属磷钨酸、醋酸铀等在透射电镜下形成黑色的背景反衬低密度的标本如病毒为白色透亮，从而清楚地显示出被衬物的细节结构。
材料与仪器
步骤
负染色法主要有两种：
(1) 悬滴法：用一根细滴管或结核菌素注射器吸一滴标本悬液滴在有膜的铜网上，如带膜铜网已从滤纸上取下，则此铜网很可能被吸到加标本的吸管头上或注射器针头上，铜网上也可能被翻转而污染，故采用悬滴法时，应将带膜铜网粘附于滤纸上，切不可取下。铜网滴上标本后静置片刻，然后用滤纸从铜网边上吸去多余的标本悬液，未待标本干燥即滴上负染色液。染色 1~2 min, 用滤纸吸去多余染液，再用蒸馏水滴在铜网上洗 1~2次，再用滤纸吸去水分，待干后用电镜观察。
(2) 漂浮法：漂浮法是将有膜的铜网的膜面覆盖漂浮于标本悬液上。具体方法是先将滤纸在加温熔化的液体石蜡中浸渍后取出，干后即成带蜡滤纸。用吸管吸取标本悬液滴于蜡滤纸上，将带膜铜网覆盖其上， 1~2 min 后用镊子夹起铜网，用滤纸吸去多余的标本悬液，在另一蜡纸上滴一点负染色，将吸有标本的铜网膜面向下漂浮于负染色液滴上，染 1~2 min, 用镊子夹起铜网，用滤纸吸去多余的染液，待干后用电镜观察。
常见问题
负染色技术已是当代电镜生物标本制备中一项应用普遍、效力较高而又比较简便的技术，尤其在病毒学研究中，对揭示病毒的形态结构十分有效，对病毒学的发展起了较大的作用。
负染色方法有如下突出的优点：明显提高了标本的反差和分辨力。简便易行，不要求高纯度的标本制备。染色本身不改变生物标本的活性，不因染色而造成标本变形。
来源：丁香实验
