分离人角膜内皮细胞

(a)用PBSA将角膜清洗3次，每次5 min。

(b)剪除残留的巩膜，结膜和虹膜。

(c)加人2 ml 1.2 U/ml中性蛋白酶II，4℃过夜，轻微搅动。

(d)将加人中性蛋白酶II的角膜放人4℃摇床摇30 min。

(e)用DMEM/F-12/GASP清洗角膜。

(f)解剖显微镜下，小心去除小梁网，剥离内皮层并用胰蛋白酶/EDTA消化37℃，30 min。

(g)加入同等体积的DMEM/F-12/2FB并拍散细胞。

(h)离心400g,10 min,弃去上清。

(i)加人1 ml培养基，轻柔的重悬细胞并计数。